使用基因融合表達系統在大腸桿菌中表達外源基因已越來越受歡迎。其原因在很大程度上歸因于融合系統能夠產生大量的可溶性的融合蛋白。谷胱甘肽轉移酶以及硫氧還蛋白均被證實能非常成功地生產正確折疊、有生物活性的蛋白質。其中每一種都備有方便的純化方法，可將融合蛋白與細胞污染物分開。所產生的蛋白質適用于進行其生物學活性或（和）相互作用的研究。隨著融合表達方法的普遍應用，將 N 端的攜帶蛋白部分從 C 端的目的蛋白中裂解出來的能力就顯得更加重要。
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| 實驗材料 | 1 mg／ml 融合蛋白 |
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| 試劑、試劑盒 | 200 μg Xa 因子／ml 反應緩沖液2 × SDS 樣品緩沖液 |
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| 儀器、耗材 | 沸水浴 |
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| 實驗步驟 | 1. 準備兩個小量預試驗反應以確定最佳溫育時間。 反應 1:20 μl 含有 1 μl 200μg /ml Xa 因子的 1 mg/ml 融合蛋白 反應 2:5 μl 不含 Xa 因子的 1 mg/ml 融合蛋白（模擬消化） 室溫下反應。
2. 分別在 2、4、8 和 24 h 取出 5 μl 反應液，加 2 × SDS 樣品緩沖液 5μl ，-20℃ 下凍存。
3. 在 24 h 時，將 5 μl 反應 2 （模擬消化）液與 5 μl 2 × SDS 樣品緩沖液混合。
4. 將 5 μl 原始融合蛋白溶液與 5 μl 2 × SDS 樣品緩沖液混合（未裂解對照）。
5. 將所有樣品于沸水浴中加熱 10 min，加樣到 SDS-聚丙烯酰胺凝膠上電泳，根據裂解程度確定適當的溫育時間。如果僅出現明顯的部分裂解，應增加酶的用量和（或）延長溫育反應時間。如未發生裂解，則依據輔助方案進行。
6. 確定了適當的裂解條件后，將余下的融合蛋白樣本按比例擴大反應，僅留小量的未裂解融合蛋白作對照用。以 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳監測裂解程度。 展開 |
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| 注意事項 | 經谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠純化的融合蛋白，可在 PBS 緩沖液中進行 Xa 因子消化。或者將蛋白質溶解在 20 mmol/L Tris ? Cl（pH 8.0）/ 1mmol/L CaCl2/ 100mmol/L NaCl 中。盡管大多數融合蛋白可保存于 4℃，但直至步驟 6，應將其保存在 10% 甘油中于 -70℃ 下儲存。 |
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