實驗方法原理
實驗材料 待檢的病毒標本
試劑、試劑盒 0.85% 的無菌生理鹽水阿氏 (Alsever)液磷酸鹽緩沖液 (PBS) 紅細胞懸液
儀器、耗材 96 孔微量血凝板滅菌注射器三角燒瓶離心管
實驗步驟
1. 選擇適當的 96 孔微量血凝板，如果使用雞或火雞紅細胞，應選用 V 型微量血凝板；如果使用豚鼠或人"O"型紅細胞，應選用 U 型微量血凝板。
2. 除第 1 列外，其它所有孔中均加入 50 μL 生理鹽水或 PBS。
3. 在第 1 列的每孔中分別加入 100 μL 待檢病毒標本。
4. 用多道加樣器從第 1 列的每孔中吸出 50 μL 加至第 2 列相應的每孔，混勻。依次作倍比稀釋至第 11 列，混勻后棄去 50 μL。
5. 第 12 列各孔作紅細胞對照。
6. 用多道加樣器在板中每孔中加入 50 μL 0.5% 的雞紅細胞懸液，注意從第 12 列開始依次加到第 1 列，并注意更換吸頭。
7. 混勻后室溫 (22℃~25℃) 靜止。如使用雞或火雞紅細胞，則需要 30 min; 如使用豚鼠或人"O"型紅細胞，則需要 60 min 。
8. 標本血凝滴度的確定
(1) 血球凝集結果：以"++++，+++，++，+，±，-”來表示；
紅細胞均勻地鋪于孔底上者為"++++";
紅細胞鋪于孔底，面積稍小，邊緣不整齊者為“+++” ;
紅細胞形成一個環狀，周圍有小凝集塊者為“++”;
紅細胞形成一個小團，但邊緣不整齊有小凝集塊者為“+” ;
紅細胞于孔底形成一個小團，邊緣整齊光滑有立體感，或將血凝板傾斜片刻，可見紅細胞滑動如淚滴狀則為"-"。
(2)
血凝滴度計算：血凝試驗的結果以出現＋＋稀釋度的倒數為判定終點，也就是一個血凝單位。它表明此濃度的病毒能引起等量的紅細胞發生凝集，此稀釋度的倒數為紅細胞凝集滴度，簡稱血凝滴度。理論推算，出現血凝"++"的高一個稀釋度應為“-”低一個稀釋度應為“++++”（或"+++")。4
個血凝單位計算：將血凝單位除以 4, 例如某標本的血凝滴度為 1 : 640, 則它的四個血凝單位應為： 640/4=160, 即將標本進行 1
: 160 稀釋時，其稀釋液中含 4 個血凝單位。
收起
注意事項
當兩種病毒同時感染同一細胞時，可發生一種病毒的增殖抑制了另一種病毒增殖的現象稱為干擾現象
(interference)
。有時同種病毒的不同型或不同株之間也可發生干擾現象。對這一現象機制研究首先考慮的是第一種病毒感染后，宿主細胞表面的受體被結合或細胞發生了代謝途徑的變化，從而阻止了另一種病毒的吸附、穿入細胞或生物合成。進一步研究發現，經滅活的病毒也具有干擾作用，這就難以用代謝途徑變化來解釋。以后發現滅活病毒在細胞中可誘導細胞產生抑制病毒復制的一組蛋白質，被稱為干擾素
(interferon, IFN) 。干擾素的發現啟動了一系列細胞抗病毒作用及病毒免疫的研究。
干擾滴定的原理是將不產生 CPE 的病毒（干擾病毒）先感染細胞，培養一定時間后再用相應的能產生 CPE 的病毒感染同一細胞，繼續培養一段時間。如果能產生 CPE 的病毒其形成 CPE受到了抑制，則表明干擾病毒可抑制產生 CPE 病毒的增殖。不產生 CPE 的細胞培養孔即為干擾滴定的陽性孔，計算陽性孔數，用 Karber 法確定干擾病毒的滴度。
其他
阿氏 (Alsever)液將 20.5 g 葡萄糖、 8.0 g 擰檬酸鈉 (Na3C6H5O7·2H20) 、 0.55 g 擰檬酸 (C6 H8O7) 和 4. 2 g NaCl 溶于去離子水并定溶至 1 000 ml(pH7. 1) 。 112℃、 20 min 高壓滅菌，4℃備用。
磷酸鹽緩沖液 (PBS) 將 8. 5 g NaCl 、 1. 1 g Na2HPO4 和 0. 3 g NaH2PO4 ?H20 溶于去離子水并定溶至 1 000 ml(pH 7. 2) 。 121℃ 15 min 高壓滅菌， 4℃備用。
紅細胞懸液 用10 ml 或 20 ml 滅菌注射器先吸入約 3~5 ml Alsever 氏液，然后從雞心臟采集雞血 5~10 ml, 迅速注入盛有 Alsever 氏液的三角燒瓶中，搖勻， Alsever 氏液與雞血的比例為 4: 1 。使用前吸取紅細胞懸液至離心管中，加人 5~10 倍體積的生理鹽水洗滌 3 次，前兩次2 000 r/min離心 5 min, 最后一次同速離心 10 min 棄上清液，用無菌生理鹽水配成 0.5%濃度的紅細胞懸液， 4℃備用，不得超過 3 天。如使用豚鼠或人 "O"型紅細胞，應該使用 0. 75% 的紅細胞懸液。