ABO血型檢測
輸血前對受血者和供血者必須做RBC抗原檢查及血清抗體檢測,二者的結果必須一致。用已知的血型抗體血清去鑒定未知的RBC血型稱主側試驗(正定型),用已知A型、B型的RBC去檢查未知的血清,從反面確定血型稱為副側試驗(反定型)。兩項檢測應由人工分別進行。確認兩者結果完全相符時才可發生報告。
所用抗體血清除抗A標準血清和抗B標準血清外,盡可能再加高滴度的抗A+B血清(O型血清),可發現變異血型。ABO標準血清的質量必須完全符合要求標準,這一點非常重要。臨床ABO定型錯誤的主要原因就是血清質量不高。所用的RBC,應收集前1天已經確定的A型和B型RBC數人份,分別用生理鹽水洗滌數次,制成5%RBC混懸液。此懸液最好每日新配,如保存于冰箱里,不能超過3天。
鑒定血型注意事項
正定型注意事項:①更換新的批號抗血清或對試驗結果有懷疑時,可設陽性、陰性和自身對照。抗A管的陽性對照用抗A標準血清加已知的A型紅細胞;抗B管的陽性對照用抗B標準血清加已知的O型紅細胞;自身對照用兩支試管,其中一支是被檢者血清加被檢者紅細胞,另一支試管中相繼加入被檢者血清與相應5%紅細胞生理鹽水混懸液,加入量及操作步驟與正定型試驗相同。判定結果時,首先看對照管,當陽性對照管為陽性,陰性對照管為陰性,自身對照管為陰性時,測定管的結果才可信,否則必須查找原因。②為避免交叉污染,吸管、試管、破片等用品只能1次性使用,紅細胞懸液濃度過高或離心力過大,可造成假凝集,操作時必須注意。操作環境溫度應在20~25℃,操作中應嚴格遵守查對制度,觀察后要立即記錄正確結果。③被檢紅細胞異常,如A或B亞型。白血病可使A或B抗原減弱而誤定為O型;霍奇金病也有類似白血病的情況,出現獲得性B或A表現等。
反定型注意事項:①不宜用玻片法,因為獻血者或患者血清有時凝集力較弱,必須經過離心使紅細胞緊密接觸,否則不足以使紅細胞凝集。試管離心后,應先觀察上清液有無溶血,然后搖動底層細細胞進行觀察,若出現溶血現象表明存在抗原抗體反應并有補體激活,應視為陽性反應。因為患者新鮮血清做反定型時,由于補體作用發生溶血,如未注意溶血現象,會使結果判斷錯誤或遺漏。②反定型必要時加管“O”型紅細胞以查出孟買型抗H抗體,同時可查是否有緡錢狀細細胞形成和血清中偶可見到的少數與血型抗原無關但能使紅細胞發生凝集的物質。老年人、白血病患者、骨髓瘤患者、先天性免疫球蛋白缺乏、長期大量應用免疫抑制劑者,血型抗體可減弱或消失,造成反定型困難。血清中存在非特異性血型抗體,冷凝集素效價增高,多發性骨髓瘤免疫球蛋白異常均可造成反定型困難。
導致正反定型不一致的常見問題:ABO分型標準血清效價太低、親和力不強。細細胞懸液配制過濃、過淡,抗原比例不適當,使反應不明顯,可出現假陰性。受檢者紅細胞上抗原位點太少或抗原減弱。受檢者血清中缺乏應有的抗A、抗B抗體,或其效價過低。受檢者血清中蛋白紊亂或實驗室溫度過高,常引起紅細胞呈緡錢狀排列。細菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往也是正反定型不合的原因。血清中有意外抗體如自身抗I、抗P、抗M、抗N等。新生兒、老年人、低免疫力人群的血清中的抗A、抗B效價太低甚至缺乏,均可出現正反定型不均。
交叉配血試驗
交叉配血試驗是指檢查患者和供血者血清中是否存在與對方RBC起反應的抗體,以選擇適于輸血的血液。此項檢查的目的在于防止發生輸血反應(溶血)。這里應考慮的是雖然患者和供血者的血液ABO血型相同,hho(D)因子相等,交叉配血試驗也無異常反應,可以認為輸血是安全的,但紅細胞膜上的抗原完全相同的人只有一卵雙生兒,因此輸入患者體內的紅細胞有時起異物作用,產生免疫抗體。如果患者血清中存在抗體,在檢查的低限值以下時,輸入體內紅細胞可以發生記憶性免疫反應,使抗體量迅速增加,在輸血后7~10天可發生迅速的RBC破壞。
因此交叉配血試驗,即使未呈現異常反應,以后也有復查的必要,所以不能扔掉供血者的血液,需要放在冰箱中保存2~3周,對于重復輸血的患者要每周采血做1次交叉配血試驗,以觀察是否有免疫抗體的產生。
輸血反應的檢查
關于輸血反應的原因主要有:①血型不合;②發熱反應;③過敏反應;④疾病反應;⑤血液被細菌污染等。此外還有心臟負荷過重、枸櫞酸中毒、肝障礙時氨中毒、血栓靜脈炎、空氣栓塞等。
不合輸血原因分析:①ABO血型鑒定錯誤:由于只做主側試驗,而且使用全血,因為標準抗體血清不佳而發生鑒定錯誤。交叉配血時因緊急輸血只作血型鑒定,未做交叉配血試驗,以至于未發現血型錯誤。將ABO血型的變異型(Ax、Am、Bx、Bm)鑒定為O型,輸O型血,雖無凝集反應,但抗體被吸附,致敏RBC破壞而發生反應。②未做交叉配血試驗:因搶救性輸血,時間緊迫而未做交叉配血試驗,可能因ABO血型系統以外的抗原、抗體反應引起輸血反應。③交叉配血試驗的做法問題:由于精神不集中,責任心不強,忘記加血清。或只做生理鹽水法而未做不完全抗體檢測法。④人為的事故性錯誤:如取錯血樣、貼錯標簽等。
輸血反應檢查步驟:輸血反應的檢查有癥狀分析和原因分析兩方面,當然重點在原因分析方面。因為查明原因和排除輸血反應的原因對今后再輸血是非常必要的。輸血反應最好由兩名有經驗的檢驗醫師進行檢查為好。主要措施有:①立即中止輸血。②將殘血和輸血用具送檢驗科檢查。③復查受血者,供血者的血型及交叉配血試驗。檢查時要用試管法,不僅用肉眼檢查還要在顯微鏡下看,同時要考慮有無亞型或變異型。檢查時不僅用抗A、抗B血清,還要用抗A+B血清(O型血清)。必要時檢查供血者血袋和留取血樣試管是否相符。④采取患者血液分裝兩支試管,一管加肝素抗凝,一管分離血清。⑤留取患者尿液送檢,檢查有無紅細胞管型,血紅蛋白(Hb)尿、膽紅素、含鐵血黃素等,尿量等。⑥必要時檢查腎功和DIC。⑦要了解血液在輸血前的情況,如是否經過冷凍,是否在室溫放置太久,輸血前是否將血液加溫處理等。