血栓與止血臨床檢驗的影響因素(5)

五、實驗方法的影響

    理想的實驗方法要求準確性和精密度較好，又簡便、快速能適合常規應用：因所用實驗方法的不同，其所得的結果也可不相同。例如，測定血漿纖維蛋白原的方法可歸為四類，它們各具優缺點，目前推薦用Clauss（凝血酶凝固時間法）法。

    1、功能測定法  又可分為測重法、酚試劑比色法、紫外光度法、測氮法、濁度法和凝血酶凝固時間法等。這類方法的優點是有凝血功能的纖維蛋白原，又稱為可凝固蛋白（clottable protein），故特異性較好。方法可簡可繁，常規使用中，多采用較簡便的C1auss法。據1975年美國調查，1939個臨床實驗室中，用此法者占1824家（94%）。

    2、理化測定法  又可分為鹽析法（用亞硫酸鈉、硫酸銨或氯化鈉鹽析，用蛋白質顯色或比濁法測定），熱變性沉淀法和電泳法等。這類方法都比較簡單、快速，但缺點是本法的特異性不高。所測的不是有凝固功能的纖維蛋白原，可能包括部分的降解產物和/或其他蛋白。而電泳法又太繁瑣，不適于常規工作。

    3、免疫學測定法  是將純纖維蛋白原作為抗原免疫動物，制成多克隆或單克隆抗體。然后用免疫膠乳、被動血凝或反向血凝、單向免疫擴散、火箭電泳以及ELISA等方法測定。優點是方法相對簡便，但缺點是所測的不僅是可凝固的纖維蛋白原，可能包括了它的降解產物，也可能包括了異常纖維蛋白原(dysfibrinogens)。

    4．PT-Der法  即凝血酶原時間（PT）衍生纖維蛋白原法。本法的理論依據是當PT測定完成時，全部纖維蛋白原均變成纖維蛋白，其形成的濁度與纖維蛋白的含量成正比，可由濁度直接推算出纖維蛋白原的含量。當血漿纖維蛋白原含量在正常范圍時，PT-Der法與經典的clauss法無顯著差異或略高于clauss法；但當纖維蛋白原減低時，PT-Der法往往偏高（P<0.00l），故此法用于纖維蛋白原減低者應慎重。有人用clauss法、雙縮脲法和PT-Der法對纖維蛋白原含量作了比較，結果是：雙縮脲法在纖維蛋白原正常組（2.0-4.0g/L，n＝32）、纖維蛋白原增高組（>4.0g/L，n＝8）和纖維蛋白原減低組（<2.0g/L，n＝29）均顯示測定值偏高。然而，PT-Der法在正常組與Clauss法相比，無差異（P>0.05）；但是增高組和降低組均有顯著差異（P<0.05、P<0.01），表 7。    

表6不同方法測定纖維蛋白原含量的比較（單位：g/L）  

     注：與clauss法比較，*p<0.05，**p<0.01

     六、操作者技術的影響

    操作者的技術，有的熟練，有的生疏。有人比較了一個技術熟練的專業技術人員與一個技術生疏的實習學生，對同一份標本，用同樣的試劑、儀器和方法，檢測PT、APTT、凝血酶時間(TT)和纖維蛋白原(Fg)，其結果出現了差異(表8)。因此，對技術熟練者精益求精，不斷提高；對技術生疏者，應加強上崗前培訓，不斷操練，由生疏變熟練。 

表7操作者技術對檢測結果的影響 

     注：二者手工法比較*P<0.05**P<0.01；二者儀器法比較*P<0.05**P<0.01