一、項目名稱:
血漿凝血酶原時間測定(prothrombin time ,PT)
二、檢驗方法名稱:
凝結法
三、方法學原理:
在確定量的血漿樣本經過一定時間的加溫后,加入試劑。加入試劑后,采用波長為660nm的光照射樣本。凝血過程(纖維蛋白原轉化為纖維蛋白)中血的渾濁度可以通過測量散射光光強度的改變來測定。從散射光光強度的測定,可以做出凝血曲線,通過Percentage
Detection Method法求得凝血時間。
四、方法學溯源:
凝血酶原時間(PT)測定是Quick于1935年創立的。在受檢血漿中加入過量的組織凝血活酶(人腦、兔腦、胎盤及肺組織等制品的浸出液)和鈣離子,使凝血酶原變為凝血酶,后者使纖維蛋白原轉變為纖維蛋白。觀察血漿凝固所需要的時間即凝血酶原時間。其凝固時間取決于凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅴ、Ⅹ、Ⅰ的水平。該試驗是反映外源凝血系統最常用的篩選試驗。
五、儀器:
(一)型號:Sysmex CA—1500自動血液凝血分析儀
(二)分析和計算參數:
1.處理量:約120個測試/小時
2.所需樣本量:50μl
3.檢驗時間:在最長檢驗時間之內測出結果,典型最長檢驗時間:100秒
4.重復性:CV≤2%
5.計算參數:凝血酶原活動度(PT%)
凝血酶原比值(PT R)
國際標準化比值(INR)
六、試劑及配套品:
(一)試劑:
1. 凝血活酶含鈣試劑(Thromborel? S)
(1)商標:德靈(DADE BEHRING)
(2)包裝規格:Pack for 10×4ml
(3)代碼:No.OUHP 29 , or
(4)參數:ISI(國際敏感度指數)=0.97
(5)成分:
1)Thromborel? S Reagent :
a. 凍干人胎盤促凝血酶原激酶(lyophilized human placental thromboplastin)
b. 氯化鈣 (calcium chloride)
c. 穩定劑 (stabilizers)
2) 防腐劑(Preservatives):
a.慶大霉素(Gentamicin)(0.1g/L)
b. 5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮和2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮(5-chloro-2-methyl-4-isothiazol-3-one and 2-methyl-4-isothiazol-3-one)(最大量 20mg/L)
2.佛羅那巴比妥緩沖液(Dade? Owren'S Veronal Buffer)
(1)商標:德靈(DADE BEHRING)
(2)包裝規格:Pack for 10×10ml
(3)代碼:B4234-25
(4)成分:
1)2.84×10-2M的巴比妥鈉 (sodium barbital)
2)1.25×10-1M的氯化鈉 (sodium chloride)
3) PH 7.35±0.1
3. 清洗液(Cleaning)
2%次氯酸鈉溶液(自配)
(二)配套品:
1.標準血漿(Standard Human Plasma)
(1) 商標:德靈(DADE BEHRING)
(2) 代碼:No. ORKL
2.校準質控血漿(Ci-Trol?)
(1) 商標:德靈(DADE BEHRING)
(2) 代碼:Level 1, B4244-10
Level 2, B4244-20
Level 3, B4244-30
3.質控血漿(Control Plasma)
(1) 商標:太平洋(Pacific Hemostasis)
(2) 代碼及規格:Level 1 (Normal), 100595 10×1ml
Level 2 (Abnormal), 100596 10×1ml
Level 3 (Abnormal), 100597 10×1ml