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  • 發布時間:2020-08-10 16:27 原文鏈接: 血漿纖維蛋白原測定實驗

    實驗方法原理 在血漿中加入適量的亞硫酸鈉;使纖維蛋白原形成沉淀,其余的蛋白質均尚在溶液中.將沉淀溶于氯化鈉溶液中,雙縮脲測定蛋白質的量.


    實驗步驟


    一、實驗試劑:


    1.12.5%亞硫酸鈉溶液:稱取無水亞硫酸鈉(A.R或GP〕125g溶于蒸餾水中并用蒸餾水稀釋至1000m1.


    2. 9g/L NaCL 溶液


    3. 雙縮脲試劑


    4. 標準白蛋白血清


    二、操作方法:


    在15×100mm試管內加入血漿0.5ml,再加水125g/L亞硫酸鈉溶液混勻,置于37℃水溶15min或更長時間,取出、離心、傾棄上清液,沉淀再以125g/L亞硫酸鈉溶液洗三個多小時.洗時先同小量亞硫酸鈉使它分散均勻.離心應傾棄上請液,將試管置于濾紙上,淋干管內液體于管內加入9g/L  NaCL 1.0ml,充分混臺使沉淀溶解即為“測定管”,在另一試管中用0.lm1刻度吸管準確加標準血清0.05m1并加入9g/L  NaCL溶波0.95m1,混合作為標準試管,在另一試管中加入9g/L 氯化鈉溶液1ml作為空白管.


    在空白管標準及測定管內各加雙縮脲試劑,混合后的室溫放置30min540nm波長進行比色以空白管校正吸光度到零點,讀取各管內吸光度讀數。


    三、計算:


    測定管吸光度/標準管吸光度×O.1×標準血清蛋白濃度=纖維蛋白原g/L血漿


    注意事項


    1. 亞硫酸鈉與血漿作用,有時10min尚不能使纖維蛋白析出,可適應延長時間.


    2. 以亞硫酸鈉先洗滌沉淀是為了支除纖維蛋白以外的蛋白質,所以在洗滌時須將沉淀均勻分散.


    3. 在洗滌沉淀時,如纖維蛋白原被亞硫酸鈉溶液全部或部分溶解可再將試管置37℃水浴,以待纖維蛋白原析出.


    選擇標準液時不能任選未知性能的蛋白作為血清蛋白質的標準液。


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