血清[serum]質量決定因素和使用建議

一、關于血清使用的幾點建議：

1、血清必須貯存-20℃，如存放于4℃，請勿超過兩周，對于某些單位一次無法用完一瓶，可在無菌條件下將其40-45ml分裝于無菌50ml離心管中(或血清瓶中)，由于血清解凍時體積會增加10％，必須預留此膨脹體積的空間，否則易發生污染或容器凍裂的情形。

2、一般公司所提供的血清一般為200ml和500ml裝量，因此建議在使用中宜采取逐步解凍的方法解凍血清：-20℃→4℃冰箱或冷庫溶解24小時→室溫下全溶后再分裝，一般以50 ml無菌離心管中分裝40-45ml。使用過程中要特別注意，必須規則地將血清搖晃均勻，小心勿造成氣泡，使溫度與成分均一，減少沉淀的發生。勿直接由 -20℃放置至37℃環境下解凍，因為溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而產生沉淀。

3、血清的滅活(heat-inactivation)一般是指56℃，30分鐘水浴加熱已完全解凍的血清，加熱過程中必須規則地搖晃均勻。此處理的目的是使血清中的補體成分(complement)去活化。但是，經過滅活處理的血清會因而造成沉淀的顯著增多，且會影響血清的品質。所以，有的公司所生的細胞培養用牛血清不做滅活處理，由客戶自行選擇。而診斷試劑用血清在除菌過濾前進行過滅活處理。

4、在使用血清的時候，勿將血清留置于37℃太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩定的成分會因而受到破壞，影響血清的品質。

5、一般我們在使用過程中是先過濾培養基，再加血清，勿直接過濾血清。

6、血清的沉淀物：

(1)凝絮物：其產生的原因有多種，但普遍的原因是血清中的脂蛋白(lipoprotein)變形及解凍后血清中存在的纖維蛋白(fibrin)造成，這些凝絮沉淀物不會影響血清本身的品質。除非必須，如果您想減少這些沉淀物，建議可用離心3000rpm，5min去除，或離心后取上清液加入培養基中一起除菌過濾。

(2)顯微鏡下觀察“小黑點”，通常經過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”，常會誤認為是血清遭受污染(如黑膠蟲)，而將血清放置在37℃中欲培養此“微生物”，但37℃環境下，又會使此沉淀物增多，更會誤認為微生物的增殖，但以培養細菌的培養基檢測，又沒有污染。一般而言，此小黑點不會影響細胞的生長。

二、血清質量的決定因素：

1、關于牛種：

血清質量與牛種沒有必然的聯系，但有其先天條件。

首先，澳大利亞、新西蘭的牛源之所以被國際公認為最好，原因是這些國家的牛源是“無污染”的，“無污染”的實際含義是：病毒等外源因子污染較少。至于美國，由于其國內出現了瘋牛病，其形象由此受到挑戰。這種血清安全性的觀念在發達國家認知度較高，而在我國還不夠重視。其次，牛所能獲得的營養對血清質量有影響。在我國，由于飼養條件的不同，不同地區產的血清質量是有差異的。

2、質量標準件的問題：

我國對人用生物制品生產所用的牛血清制定了國家標準，載于《中國生物制品主要原輔材料質控標準》2000年版，此標準已接近于國外胎牛血清的有關標準。內毒素：國家標準件為不高于10Eu/ml，內控標準件為不高5Eu/ml或10Eu/ml。國家標準之外的質控指標還有：免疫球蛋白、牛腹瀉病毒 (BVDV)抗體、激素、和牛源安全性驗證等。

3、牛血清的命名和選擇：

一般公司對細胞培養用牛血清的命名分二類：胎牛血清和小牛血清。對于一般的細胞系，小牛血清可以培養得很好。

三、關于牛血清白蛋白的生產工藝：

牛血清白蛋白的制備方法有Cohn's法、鹽析法、熱變性法等多種工藝。不同的生產工藝其產品的名稱、質量指標、應用領域等各不相同。

其中Cohn's法設備、工藝要求比較高，相對應的生產成本較高，但產品質量較好。牛血清組份V(FrationV)就是由Cohn's法制備的。一般白蛋白純度96-99%、外觀潔白、結晶性狀好、1%蛋白水溶液PH7.0±0.2，再根據不同的應用分成低內毒素、低脂肪酸等等的不產品，主要應用于細胞培養領域的無血清培養基中。鹽析法因生產周期長，純度低和產品聚合體高、穩定性低等缺陷已很少應用。

目前國內應用比較普遍的是熱變性法，結合較先進的超濾生產工藝，其工藝要求相對較低，制備成本低，其缺點是目前應用領域比較單一，僅供免疫診斷試劑使用。