實驗概要
應用相同濃度硫酸銨反復鹽析法將血清中γ－球蛋白及α、β球蛋白分離，最后用透析法或凝膠過濾法除鹽，即可得比較純的γ－球蛋白。
主要試劑
1．兔血清
2．PBS（磷酸鹽緩沖生理鹽水，Phosphate Buffer Saline）用0.01mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.2）配制的0.9％NaCl溶液。
3．pH7.2飽和硫酸胺溶液：用濃氨水將飽和硫酸胺溶液調到pH7.2。
4．葡聚糖凝膠G－25。
5．納氏試劑（Nesser's reagent）
溶解碘化鉀30克于蒸餾水20毫升內，再加入碘22.5克振搖使其溶解。于此碘液內加入純汞30克，用力振搖之，待溫度升高時，將燒瓶浸于冷水內，并繼續搖勻，直到暗棕碘色轉變為淡黃綠色為止。將上層溶液傾出，置于量筒內，并以蒸餾水少許洗滌燒瓶，將洗滌液一并傾入。吸取此配成之溶液1~2滴，加入1％可溶性淀粉溶液1毫升內，以試驗有無多余的碘存在，如不顯藍色（即無多余碘存在），可加入碘液（碘化鉀3克，碘2.5克溶于蒸餾水10毫升內配成）數滴于配成之溶液內，直至此液加于淀粉溶液內初顯藍色為止；將此溶液以蒸餾水稀釋至200毫升，加10％氫氧化鈉溶液975毫升，混合，即成納氏試劑。試劑新配成呈顯混濁，靜置數日，待其沉淀，再吸上層清晰液供用。
納氏試劑堿度的標定：取100ml三角燒瓶兩個，加入1N HCl 20.0ml，以酚酞作指示劑，用新配制的納氏試劑滴定，需此試劑11.0~11.5ml恰可使酚酞指示劑變成紅色時最為適宜。否則必須糾正其酸堿度。
6．縮二脈試劑
稱取純結晶硫酸銅（CuSO4?5H2O）0.39g，放于小燒杯中，加蒸餾水約50ml，用玻棒仔細攪拌使溶解，將此溶液在攪拌的協助下轉移到量筒中，再稱取酒石酸鈉鉀1.2g放于小燒杯中，加蒸餾水約50ml，仔細攪拌使溶解，亦將此溶液轉移到上述量筒中。然后慢慢的添加（邊加邊搖）2.5
N
NaOH溶液60ml，混勻，再加碘化鉀0.2g，并用蒸餾水稀釋到200ml。縮二脈試劑中，NaOH可保持溶液堿性，酒石酸鈉鉀可與Cu（OH）2
生成可溶性絡合物，防止銅沉淀，KI可促進反應加速，原理尚不明。
7．20％磺柳酸（磺基水楊酸）。
實驗步驟
一、鹽析（Salting out）
取離心管一支加入血清2ml、加入等量PBS（磷酸鹽緩沖生理鹽水）稀釋血清，搖勻后，逐滴加入pH7.2飽和硫酸胺溶液2ml，邊加邊搖，然后靜止放置20分鐘，再離心（3000轉/分）10分鐘，將上清液（主要含清蛋白）傾入試管中，留供后面實驗用。
離心管底部的沉淀用1ml PBS攪拌溶解，再逐滴加飽和硫酸胺0.5ml（相當于33％飽和度硫酸胺）搖勻后再放置10分鐘離心，（3000轉/分）10分鐘，傾棄上清液（主要含α、β球蛋白），其沉淀即為初步純化的γ－球蛋白。（如要得更純的γ－球蛋白。可重復這步鹽析過程1~2次）。
二、脫鹽（Desalting）
將葡聚糖凝膠G－25用玻棒輕輕攪拌使之懸起，傾入有尼龍布堵住下口的20Χ1cm層析柱，層析柱下口套一小段橡皮管。待全部凝膠都傾入柱內（注意凝膠要裝填均勻；若分多次加入凝膠，應在放膠前將柱內凝膠頂部攪動懸起，再將疑膠液傾入），且液面接近凝膠面時，用螺旋夾將橡皮管夾緊，然后小心放松螺旋夾，使液體慢慢流出，到液體面全部剛好流入凝膠面時，將螺旋夾再扭緊，裝柱工作即告完成（凝膠為3/4~2/3柱長），可供脫鹽使用。
在盛有γ－球蛋白沉淀物的離心管內，加入PBS 10滴并用玻棒輕輕攪拌，至全部沉淀物溶解后用滴管吸出γ－球蛋白液，將滴管插入凝膠層析柱內，管口靠近凝膠面緩慢滴入全部蛋白液，然后小心擰開螺旋夾，使液體流速控制在每分鐘10滴左右，待全部蛋白大部分液體流入凝膠柱后，再小心加入PBS 10ml。
準備10支干凈小試管用于收集凝膠洗脫液，每收集20滴換一支試管，直到全部試管都收集洗脫液后，將螺旋夾擰緊，各管留供后面試驗。
準備干凈瓷比色盤兩塊，分別于每塊比色盤凹池依次加入納氏試劑和縮二脲試劑各1滴，然后在納氏試劑比色盤的凹池再加入收集液（Nessler's agent）1滴，檢查有無NH＋。在有NH＋存在時呈黃色到橙色，記錄各孔顏色變化，以（一）（＋）（＋＋）（＋＋＋）表示不呈色或呈色深淺變化。在另一塊有縮二脲試劑瓷比色盤上每凹池加入收集液1滴，雙縮脲反應的呈色（紫紅色或紫藍色）深淺，也用上述符號記錄各管的顏色變化。
三、透析（Dialysis）
取玻璃紙（15×15cm）一張，折成袋形，將前面第一次鹽析得到的含清蛋白的上清液傾入袋內，用線繩扎緊上口（注意要留有空隙），用玻璃棒懸在盛有半杯蒸餾水的100ml燒杯內，使透析袋下半部浸入水中，對蛋白液進行透析，可將燒杯放在微量振蕩器上振蕩1小時以上，亦可常用玻璃棒攪拌袋外（燒杯中）液體，以縮短透析時間。更換蒸餾水多次，直至袋內鹽份透析完畢，用納氏試劑檢查袋外液體的NH4＋（方法同上述），觀察透析法除鹽的效果。這種方法亦可用于其它蛋白質（如γ－球蛋白）的脫鹽。