血清熱滅活的問題

血清的熱滅活是很多培養者感興趣的話題，價格不菲的血清中含有諸如生長因子，維生素，氨基酸等珍貴物質，而將它們置于50℃以上的溫度長達30分鐘是完全沒有必要的。盡管如此，在大多數實驗室之中血清的熱滅活還是作為常規來執行，多數實驗者并沒有考慮熱處理對血清中的生長因子，氨基酸等成分帶來的負面影響，在我們的技術熱線中最常被提到的就是否該對血清進行熱滅活，下面我們就對胎牛血清的熱滅活進行一些探討和解釋。

熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質，但是在胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要。Triglia和Linscott［1］曾對商業胎牛血清中的補體成分進行測定，他們發現胎牛血清中含有的C1，C6僅達成年動物血清的1-3%，而其它補體成分僅有成年動物的5-50％，至于補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補體固定實驗，我們也在多個不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結果。即使是在未稀釋的血清中，也未發現有明顯的溶血現象。另外，多數實驗室在培養前將培養液進行預熱的過程，也對熱敏的補體有滅活的作用。

根據調查，至少70％的研究者對血清的滅活僅僅是因為遵照常規操作，或者說認為是理所當然的。常規滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時間則從15分鐘到60分鐘不等.其中最常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高，許多早先認為是熱滅活的原因已經不再成立，只有少數對血清進行熱滅活的研究者在實驗中證實了這一步驟的有效性和必要性。

Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發育分化［2］；有研究結果［3］證實熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細胞的促粘附作用，在用SV-BHK、BALB-3T3、CV－1、FS-4細胞對細胞粘附實驗中，熱滅活對胎牛血清的影響小于對小牛血清的影響。

我們調查了熱滅活對胎牛血清以及對其中不同細胞株生長能力的影響。通過比較11個不同細胞株，發現其中熱滅活對6 個細胞株（HBAE，MDBK，Vero，成纖維細胞，MRC-5）的生長帶來負面影響，三個細胞株（FOX-NY，MDCK和CHO-K1）不受熱滅活的影響，而只有兩個細胞株（Balb/3T3，Sp2/0Ag14 hybrid），在熱滅活之后，細胞生長有輕微的改善。所以，在正常的操作下，熱滅活通常對細胞的生長沒有明顯的促進作用。

在對補體滅活以外，熱處理同時也對血清中可能存在的支原體具有滅活作用。多年以前，450納米孔徑的濾膜被用于加工血清時，血清中支原體的污染時有發生。針對這個問題，HyClone首家使用100納米三層濾膜連續濾過技術，自從采用這項技術以及后來的40納米濾過技術之后，我們的血清產品中沒有再發現有支原體的污染，也是使得熱滅活成為不必要的另外一個原因。

在正常操作下，熱滅活經常給血清產品帶來負面的影響，對血清的加熱經常導致血清中沉淀的產生，而導致的沉淀又常常被認為是微生物的污染。注意到這個現象之后，為了驗證污染的存在，或者促進沉淀的溶解，許多培養者往往將血清放置37℃溫育。這卻往往使情況變得更糟，血清中的蛋白進一步的析出，為了確信血清未被污染，進行的鏡檢，無菌培養試驗，和革蘭氏染色試驗更是浪費了實驗者大量的時間和精力。

總之，多數細胞培養中血清的熱滅活并不是必要的。很多場合下，熱滅活并不會改善細胞的生長，卻降低了支持細胞生長的能力。即使在少數有促進的情況下，其促進的比率也是微不足道的。另外，血清的熱滅活導致的沉淀常常被認為是微生物的污染，從而給用戶和供應商都帶來不必要的麻煩。我們建議，對于那些對血清進行滅活的用戶，需要通過試驗來證實其必要性，確定滅活的適當條件；在滅活過程中，需要嚴格認真監測，并選擇一個可重復的方案進行操作。