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  • 發布時間:2021-11-25 19:33 原文鏈接: 血清蛋白質電泳技術操作步驟

    1. 點樣 將醋酸纖維薄膜 (2.5cm×8cm) 一條,浸于巴比妥緩沖液,待完全浸透后,取出輕輕夾于濾紙中,吸去多余的溶液,再于薄膜的無光澤面的一端 2.0cm 處,用小玻片蘸取少許血清,垂直印于膜上,待血清滲入薄膜后,以無光澤面向下,兩端用數層浸濕的濾紙 ( 或紗布 ) 貼緊,加蓋,平衡 2 ~ 3min ,然后通電。

    2. 通電 一般電壓用 110 ~ 140V ,電流約 0.4 ~ 0.6mA / cm ,時間 45 ~ 60min 。

    3. 染色 關閉電源后立即將膜取出,放入染色液中浸染 2 ~ 3min ,然后移入漂洗液中漂洗數次,至蛋白條帶清晰,背景無色為止。

    4. 定量 取試管 6 支,編號依次為 0 (空白)、 A 、 &alpha;1 、 &alpha;2 、 &beta; 、 &gamma; ,將電泳圖譜亦按 A 、 &alpha;1 、 &alpha;2 、 &beta; 、 &gamma; 蛋白區帶剪開,分別裝入相應號碼試管中。再在圖譜兩端無蛋白部位剪一條寬約 &alpha;1 帶的空白帶放入空白管中。各管中加 0.4mol/L NaOH 4ml ,振搖數次,使染料色澤浸出, 30min 后,在 620nm 波長下進行比色,以空白管校正零點,讀取清蛋白及 &alpha;1 、 &alpha;2 、 &beta; 及 &gamma; 球蛋白各管的吸光度。


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