摘
要 目 的 ： 選 擇 提 取 血 清 HBV－ DNA模 板 的 最 佳 實 驗 。 方 法 ： 用 堿 裂 解 法 、 直 接 煮 沸 法
二 種 方 法 提 取 血 清 HBV－ DNA模 板 然 后 進 行 對 比 分 析 。 結 果 ： 直 接 煮 沸 法 優 于 堿 裂 解
法 ， 具 有 方 法 簡 單 易 行 且 陽 性 率 高 于 堿 裂 解 法 ， 二 種 方 法 結 果 經 u檢 驗 后 ， 具 有 顯 著
性 差 異 P<0 01。 結 論 ： 直 接 煮 沸 法 提 取 血 清 HBV－ DNA模 板 優 于 堿 裂 解 法 ， 是 值 得
推 薦 的 一 種 經 濟 、 簡 單 、 易 行 實 驗 方 法 。
關 鍵 詞 ： 乙 肝 病 毒 (HBV)； 脫 氧 核 糖 核 酸 (DNA)； 直 接 煮 沸 法 ； 堿 裂 解 法 ； 血 清 ；
對
血 清 HBV－ DNA模 板 的 提 取 ， 目 前 常 用 的 方 法 是 堿 裂 解 法 (試 劑 盒 中 帶 有 的 DNA提 取 液
)。 我 們 用 同 一 份 標 本 同 時 采 用 堿 裂 解 法 、 直 接 煮 沸 二 種 方 法 提 取 血 清 HBV－ DNA模 板
。 共 做 81份 臨 床 血 清 標 本 。 儀 器 為 美 國 PE公 司 5700型 熒 光 定 量 PCR儀 。 試 劑 盒 有 中 山
醫 科 大 學 達 安 基 因 診 斷 中 心 提 供 。 在 完 全 相 同 的 條 件 下 進 行 定 量 測 試 然 后 做 對 比 分
析 ， 結 果 顯 示 ： 直 接 煮 沸 法 優 于 堿 裂 解 法 ， 并 有 省 時 、 省 試 劑 、 省 TiP尖 、 操 作 簡 便
、 易 等 優 點 ， 且 能 夠 獲 得 良 好 的 檢 測 結 果 ， 陽 性 率 亦 高 于 堿 裂 解 法 ， 是 值 得 推 廣 的
一 種 提 取 血 清 HBV－ DNA模 板 的 極 好 方 法
1 材 料 與 方 法 ：
1
1 1 堿 裂 解 法 ： 取 無 菌 血 清 50ul和 50ul DNA提 取 液 (0 1mol/LNaoH.2mol/LnaCI.0
5％ SDS) 于 1 5ml Eppendorf管 中 充 分 混 勻 ， 煮 沸 10分 鐘 后 取 出 放 置 4℃ 10小 時 ，
10000r/min離 心 5min取 上 清 液 2ul于 反 應 管 內 ， 10000r/min舜 時 離 心 ， 上 機 擴 增 并 定
量 檢 測 ， HBV－ DNA拷 貝 數 。
1
1 2 直 接 煮 沸 法 ： 直 接 取 50ul無 菌 血 清 1 5ml Eppendorf管 中 煮 沸 10分 鐘 后 取 出 放 置
4℃ 10小 時 10000r/min， 離 心 5min， 取 上 清 液 2ul于 反 應 管 內 ， 10000r/min瞬 時 離 心
， 上 機 擴 增 并 定 量 檢 測 HBV－ DNA拷 貝 數 。
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2 熒 光 定 量 PCR儀 檢 測 ： 將 上 述 二 種 方 法 提 取 的 HBV－ DNA模 板 ， 在 完 全 相 同 的 條 件 下
(93℃ 2min 93℃ 45S 55℃ 2min)共 40循 環 )， 用 PE－ 5700型 熒 光 定 量 PCR儀 分 別 進 行 定
量 檢 測 并 做 對 比 分 析 。
2 結 果 和 討 論
二
種 方 法 所 獲 HBV－ DNA平 均 拷 貝 數 ， 直 接 煮 沸 法 為 4 48× 107拷 貝 ／ ml血 清 ， 陽 性 率 為
38 27％ (31／ 81)， 測 定 范 圍 4 21× 103～ 1 52× 109。 堿 裂 解 法 為 4 1× 108拷 貝 ／
mL血 清 ， 陽 性 率 為 27 16％ (22／ 81)， 測 定 范 圍 1 05× 105～ 1 84× 109。 經 U檢 驗 二 者
比 較 具 有 很 好 的 顯 著 性 (U=2 61 P<0 01)。
堿
裂 解 法 裂 解 液 中 含 有 不 溶 性 的 SDS顆 粒 ， 加 樣 時 須 特 別 注 意 充 分 混 勻 ， TiP尖 太 細 時
會 影 響 試 劑 的 加 入 ， 并 且 此 顆 粒 極 易 下 沉 給 操 作 者 帶 來 不 便 ， 稍 有 不 慎 將 會 造 成
DNA模 板 提 取 不 充 分 使 結 果 不 準 確 。 而 直 接 沸 法 不 存 在 以 上 問 題 ， 大 大 簡 化 了 操 作 程
序 ， 提 高 了 工 作 效 率 ， 避 免 了 操 作 可 能 帶 來 的 誤 差 ， 同 時 也 提 高 了 HBV－ DNA檢 測 的
陽 性 率 (11％ )。
堿
裂 解 法 對 實 驗 室 來 說 可 能 只 有 10％ 左 右 誤 差 ， 但 對 具 體 患 者 來 講 卻 是 100％ 的 錯 誤 ，
況 且 10％ 的 誤 差 已 經 不 低 。 因 此 筆 者 認 為 血 清 ， HBV－ DNA模 板 的 提 取 直 接 煮 沸 法 優
于 堿 裂 解 法 ， 是 值 得 實 驗 室 推 廣 應 用 既 經 濟 又 簡 單 易 行 的 方 法 ， 不 失 為 一 種 行 之 有
效 的 操 作 方 法。