(1)心肌鈣蛋白T、I的快速檢測:
①將包裝紙打開,標記上樣品編號。
②加5~6滴血清樣品到樣品槽中。
③在10~15min內觀察色帶出現情況。
附注:
①試紙條只能用1次,重復使用無效。
②試紙條試驗區和對照區均不出現色帶,取另一試紙條重復檢測仍無結果,則表示試紙條失效。
③免疫層析技術測定CTnT、CTnI適合床邊快速試驗,但只是定性或半定量,要真正了解病情嚴重程度及選擇治療措施還需定量測定。
(2)心肌鈣蛋白T的ELISA法測定:
①在包被板中分別加入標準血清,對照血清和病人標本于相應的孔內各50μl。
②每孔各加孵育緩沖液50μl,并輕輕混勻。
③室溫下孵育60min后洗滌三次,10min內完成。在吸水紙上用力拍打微孔。以除去殘留水滴。
④每孔各加入酶結合物100μl,輕輕混勻。
⑤倒空微孔板中的孵育液,用洗滌液將微孔洗三次,在吸水紙上用力拍打微孔,以除去殘留水滴。
⑥將200μl色原底物溶液加入相應的孔中,避光,輕輕混勻,靜置30min。
⑦用酶標儀在10min內,于405nm和630nm雙波長下測定吸光度值(OD值)。
附注:
①CTnT待測標本最好用血清,不要用抗凝血漿,因為抗凝劑如:肝素、EDTA等對CTnT有影響。
②由于CTnT是心肌細胞損傷釋放出來的,所以盡量避免標本溶血,如果標本溶血很可能造成檢測結果增高。
③配制好孵育液不要冷凍保存,應放在2~8℃冷藏。
④實驗前應注意試劑有無失效,如變質,其顏色加深。
⑤為了提高CTnT檢測的可靠性,應注意加樣的準確及其他操作過程,比色最好選用雙波長。