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  • 發布時間:2019-03-30 16:08 原文鏈接: 血糖測定實驗——酶法

    實驗方法原理血糖中β-D葡萄糖在葡萄糖氧化酶催化下,氧化成葡萄糖酸,并產生過氧化氫,過氧化氫在過氧化物酶催化下,氧化氧的受體——鄰聯甲苯胺產生有色化合物。在有足夠的葡萄糖氧化酶和過氧化物酶存在下,形成有色化合物的量和葡萄糖的量成正比,并在625 nm處有最大吸收。
    實驗材料

    葡萄糖

    試劑、試劑盒

    鄰聯甲苯胺 醋酸 葡萄糖氧化酶 辣根過氧化酶

    儀器、耗材

    試管 試管架 吸量管 722S分光光度計

    實驗步驟

    溶液配制:

    1. 1%鄰聯甲苯胺溶液:1 g鄰聯甲苯胺溶于100 ml無水乙醇,于棕色瓶保存。
     
    2.醋酸緩沖液(pH 5):300 ml 0.15 mol/L醋酸(8.7 ml冰乙酸定容至1 L),700 ml 0.15 mol/L醋酸鈉混合后調pH 至5(用氫氧化鈉或鹽酸)。
     
    3.葡萄糖氧化酶,辣根過氧化酶:10 mg溶于10 ml水中,放于4 ℃保存。
     
    4.含鄰聯甲苯胺試劑:150 mlpH5醋酸鹽緩沖液,1 ml葡萄糖氧化酶溶液,1 ml過氧化物酶,1 ml 1%鄰聯甲苯胺溶液,混合后保存在4 ℃下,可存放7周。
     
    5.標準葡萄糖溶液:100 mg干燥的葡萄糖溶于100 ml 0.3%安息香酸溶液(安息香酸0.3 g溶于100 ml水),成1 mg/ml。

    實驗操作:


    取三支試管,按如下順序操作:

    空白管蒸餾水                                      1 ml
    標準管標準葡萄糖溶液                      1 ml
    測定管待測樣品(無蛋白血濾液)       1 ml

    待測樣品含糖控制在400~600 μg/ml。每隔半分鐘依次向各管加入含鄰聯甲苯胺試劑5 ml,立即混合并準確反應10 min(夏季反應時間可縮短),在波長625 nm處,每隔半分鐘分別讀取光密度值,以空白作為比色時的對照。

    按下列公式計算:

    展開


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