血脂包括多種指標,測定方法也因不同的指標而不同,最基本的包括總膽固醇、甘油三酯和血高密度膽固醇(HDL)
l、總膽固醇(TC)
酶法(COD-PAP法)
原理:血清中的膽固醇約1/3為游離膽固醇,2/3為與脂肪酸結合的膽固醇酯。膽固醇酯被膽固醇酯水解酶(CEH)水解成游離膽固醇,后者被膽固醇氧化酶(COD)氧化成膽甾烯酮并產生過氧化氫,再經過氧化物酶催化,使4-氨基安替比林與酚(三者合稱PAP)反應,生成紅色醌亞胺色素(Trinder反應)。醌亞胺的最大光吸收在500nm左右,吸光度與標本中TC含量成正比。
正己烷抽提L-B反應顯色法
原理:用氫氧化鉀乙醇液使血清蛋白變性,并使膽固醇酯水解為膽固醇。加水后用正己烷分溶抽提,可從堿性乙醇中定量地提取膽固醇(達99.7%)。提取的膽固醇溶液中除少量其它固醇(人血清中約含膽固醇的1%)以外,基本上不含干擾物。故測定結果與同位素稀釋-氣相色譜質譜法(決定性方法)接近。
2、甘油三酯
酶法(COD-PAP法)
原理:用脂蛋白酯酶(LPL)使血清中三酰甘油(TG)水溶解成甘油與脂肪酸,將生成的甘油用甘油激酶(GK)及三磷酸腺苷(ATP)磷酸化。以磷酸甘油氧化酶(GOP)氧化3-磷酸甘油(G-3-P),然后以過氧化物酶(POD),4-氨基安替比林(4-APP)與4-氯酚(三者合稱PAP)反應顯色,測定所生成的H2O2,故本法簡稱為CPO-PAP法。
變色酸顯色法(CDC參考方法)
原理:用二氯甲烷提取血清TG,同時加入硅酸去除磷脂、游離甘油、甘油一酯、部分甘油二酯及蛋白。TG經氫氧化鉀皂化生成甘油,酸化后以過碘酸氧化甘油產生甲醛,用亞砷酸還原過剩的過碘酸后,甲醛與變色酸在硫酸溶液中加熱產生紫紅色反應,然后比色測定。
3、血高密度膽固醇(HDL)
勻相測定法
基本原理有以下幾類:PEG修飾酶法(PEG法)、選擇性抑制法(SPD法)、抗體法(AB法)、過氧化氫酶法(CAT法)
超速離心結合選擇性沉淀法
美國CDC采用本法測定參考血清的靶值,并用于評價常規方法的準確性,被認為是測定HDL-C最準確的方法。此法分三步:超速離心—選擇性沉淀—HDL-C測定。
硫酸葡聚糖-Mg沉淀法
原理:以硫酸葡聚糖DS50(MW50000±5000)與鎂離子沉淀血清中含apoB的脂蛋白[LDL,VLDL,Lp(a)],測定上清液中的HDL-C。[2]
4、血低密度膽固醇(LDL)
勻相測定法
基本原理有以下幾類:增溶法(Sol法)、表面活性劑法(SUR法)、保護法(PRO法)
β-定量法
本法為超離心結合選擇性沉淀法。超離心、選擇性沉淀二步驟與HDL-C參考方法相同,只是,Chol測定時除測定沉淀后上層的HDL-C外,還同時測定超離心后的下層液(含HDL和LDL)膽固醇。
PVS沉淀法
原理:血清中聚乙烯硫酸鹽-聚乙二醇甲醚(PVS)選擇性地沉淀LDL,離心后上層液中含HDL,VLDL和CM,用膽固醇測定酶試劑分別測定上層液和血清總膽固醇含量,二者之差即LDL-C含量。
Friedawald公式計算法
Friedawald原公式按舊單位mg/dl計算,假設血清中VLDL-C為血清TG量的1/5量計(以重量計)則:LDL-C=TC-HDL-C-TG/5。按法定計量單位mmol/L計算,則應為LDL-C= TC-HDL-C-TG/2.2。