(1)血素的滴定：
①取補體1ml，加BBS9ml，依次稀釋成1∶20，1∶30，1∶40，1∶50，1∶60，1∶80，1∶100，1∶200，1∶400，同時取50%的溶血素0.2ml，加BBS9.8ml，即為1∶100的溶血素，然后繼續稀釋成1∶800，1∶1600，1∶3200，1∶6400。
②采取方陣排列試管，縱行各管加不同濃度的補體0.1ml，橫排各管加溶血素0.1ml(皆應從最高稀釋度加起)混勻后，各管加BBS 0.2ml，補體和溶血素對照管各加BBS 0.3ml，最后在各管中加2%羊紅細胞0.1ml。各管總量為0.5ml，搖勻，放37℃水箱中30min，觀察結果。
以完全溶血的補體和溶血素最高稀釋度為各自的單位。在實際應用時，溶血素用2U(3200÷2=1600)，補體用2.5U(80÷2.5=32)。
(2)正式試驗：
①用V型微量反應板操作，每份標本作一個試驗孔。一個血清對照孔。各孔內先加BBS 0.025ml。
②用稀釋棒蘸取血清(0.025ml)加入第一孔，旋轉后移入第二孔，共八孔，如此可得1∶2～1∶256稀釋。
以小量法測定抗體的補體結合試驗為例。逐步加入各種試劑，溫育后先觀察各類對照管，應與預期的結果吻合。陰性、陽性對照管中應分別為明確的溶血與不溶血；抗體或抗原對照管、待檢血清對照管、陽性和陰性對照的對照管都應完全溶血。綿羊紅細胞對照管不應出現自發性溶血。補體對照管應呈現2U為全溶，1U為全溶略帶有少許紅細胞，0.5U應不溶。如0.5U補體對照出現全溶表明補體用量過多；如2U對照管不出現溶血，說明補體用量不夠，對結果都有影響，應重復進行試驗。補體結合試驗結果，受檢血清不溶血為陽性，溶血為陰性。