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  • 發布時間:2019-04-09 19:32 原文鏈接: 裸眼篩選重組桿狀病毒實驗

    桿狀病毒是一類在自然界中專一性感染節肢動物的DNA病毒,病毒粒子呈桿狀,基因組為雙鏈環狀DNA分子,DNA以超螺旋形式壓縮包裝在桿狀衣殼內,大小在90~180 Kb 之間。目前桿狀病毒作為高效、安全的無公害生物蟲劑廣泛應用于害蟲防治。

    實驗材料

    桿狀病毒

    試劑、試劑盒

    瓊脂糖

    儀器、耗材

    解剖顯微鏡倒置顯微鏡

    實驗步驟

    解剖顯微鏡下篩選

     

    1.  倒轉蝕斑平皿,使其處于顯微鏡的黑色背景下,以銳角向平皿照射一束亮光。

    2.  檢查野生型病毒感染的細胞中含有包涵體的蝕斑,這種蝕斑看上去折光性強,帶有輕微的黃色。

    3.  檢查β-gal 重組病毒感染的細胞中不含包涵體的蝕斑,其顏色呈灰色。

    4.  圈出平皿中覆蓋蝕斑的區域,以400x的倍數在倒置顯微鏡下檢查圈出的蝕斑,以鍛煉用裸眼分辨出每一蝕斑形態上的細微之處。 


    用倒置光學顯微鏡篩選

     

    1.  將蝕斑平皿右側稍抬起向上,以30x和40x的倍數檢查每一類型的蝕斑。

    2.  重組蝕斑帶有桔紅色,而野生型蝕斑由于包涵體的聚集而具有暗褐色外現。

    3.  在顯微鏡下見到蝕斑時, 在平皿上蝕斑下的區域點一點,從顯微鏡下移去平皿,圍出蝕斑。

    4.  將平皿倒轉放在顯微鏡載物臺上并以400x的倍數觀察蝕斑。

     

    直接用裸眼篩選

     

    1.  如果蝕斑形成較好,將平皿舉過頭頂,直接觀察平皿底部,有可能從重組蝕斑中辨別出野生型蝕斑。

    2.  野生型蝕斑周圍的區域看上去呈灰白色,而重組的蝕斑則不會。

     

    3.  用任一種上述方法鑒定出假定的重組病毒蝕斑后,挑取幾個蝕斑,將瓊脂糖塊置于1 ml 無血清培養基中,在旋渦混合器上振蕩混勻,病毒液可于4℃貯存數月備用。

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