桿狀病毒是一類在自然界中專一性感染節肢動物的DNA病毒,病毒粒子呈桿狀,基因組為雙鏈環狀DNA分子,DNA以超螺旋形式壓縮包裝在桿狀衣殼內,大小在90~180 Kb 之間。目前桿狀病毒作為高效、安全的無公害生物蟲劑廣泛應用于害蟲防治。
| 實驗材料 | 桿狀病毒 |
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| 試劑、試劑盒 | 瓊脂糖 |
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| 儀器、耗材 | 解剖顯微鏡倒置顯微鏡 |
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| 實驗步驟 | 解剖顯微鏡下篩選 1. 倒轉蝕斑平皿,使其處于顯微鏡的黑色背景下,以銳角向平皿照射一束亮光。
2. 檢查野生型病毒感染的細胞中含有包涵體的蝕斑,這種蝕斑看上去折光性強,帶有輕微的黃色。
3. 檢查β-gal 重組病毒感染的細胞中不含包涵體的蝕斑,其顏色呈灰色。
4. 圈出平皿中覆蓋蝕斑的區域,以400x的倍數在倒置顯微鏡下檢查圈出的蝕斑,以鍛煉用裸眼分辨出每一蝕斑形態上的細微之處。 用倒置光學顯微鏡篩選
1. 將蝕斑平皿右側稍抬起向上,以30x和40x的倍數檢查每一類型的蝕斑。
2. 重組蝕斑帶有桔紅色,而野生型蝕斑由于包涵體的聚集而具有暗褐色外現。
3. 在顯微鏡下見到蝕斑時, 在平皿上蝕斑下的區域點一點,從顯微鏡下移去平皿,圍出蝕斑。
4. 將平皿倒轉放在顯微鏡載物臺上并以400x的倍數觀察蝕斑。 直接用裸眼篩選 1. 如果蝕斑形成較好,將平皿舉過頭頂,直接觀察平皿底部,有可能從重組蝕斑中辨別出野生型蝕斑。
2. 野生型蝕斑周圍的區域看上去呈灰白色,而重組的蝕斑則不會。 3. 用任一種上述方法鑒定出假定的重組病毒蝕斑后,挑取幾個蝕斑,將瓊脂糖塊置于1 ml 無血清培養基中,在旋渦混合器上振蕩混勻,病毒液可于4℃貯存數月備用。 展開 |
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