實驗材料 桿狀病毒
試劑、試劑盒 瓊脂糖
儀器、耗材 解剖顯微鏡倒置顯微鏡
實驗步驟
解剖顯微鏡下篩選
1. 倒轉蝕斑平皿，使其處于顯微鏡的黑色背景下，以銳角向平皿照射一束亮光。
2. 檢查野生型病毒感染的細胞中含有包涵體的蝕斑，這種蝕斑看上去折光性強，帶有輕微的黃色。
3. 檢查β-gal 重組病毒感染的細胞中不含包涵體的蝕斑，其顏色呈灰色。
4. 圈出平皿中覆蓋蝕斑的區域，以400×的倍數在倒置顯微鏡下檢查圈出的蝕斑，以鍛煉用裸眼分辨出每一蝕斑形態上的細微之處。
用倒置光學顯微鏡篩選
1. 將蝕斑平皿右側稍抬起向上，以30×和40×的倍數檢查每一類型的蝕斑。
2. 重組蝕斑帶有桔紅色，而野生型蝕斑由于包涵體的聚集而具有暗褐色外現。
3. 在顯微鏡下見到蝕斑時， 在平皿上蝕斑下的區域點一點，從顯微鏡下移去平皿，圍出蝕斑。
4. 將平皿倒轉放在顯微鏡載物臺上并以400×的倍數觀察蝕斑。
直接用裸眼篩選
1. 如果蝕斑形成較好，將平皿舉過頭頂，直接觀察平皿底部，有可能從重組蝕斑中辨別出野生型蝕斑。
2. 野生型蝕斑周圍的區域看上去呈灰白色，而重組的蝕斑則不會。
3. 用任一種上述方法鑒定出假定的重組病毒蝕斑后，挑取幾個蝕斑，將瓊脂糖塊置于1 ml 無血清培養基中，在旋渦混合器上振蕩混勻，病毒液可于4℃貯存數月備用。