覆盆子及有效部位對老年大鼠學習記憶能力的影...（一）

覆盆子及有效部位對老年大鼠學習記憶能力的影響及機制初探

摘 要  

目的: 考察覆盆子有效部位對自然衰老大鼠學習記憶能力的影響。

方法: 18 月齡大的自然衰老大鼠分為老年組、銀杏黃酮陽性組、覆盆子乙酸乙酯部位組、覆盆子氯仿部位組、覆盆子全藥材組，另取 3 月齡的大鼠為青年對照組。覆盆子乙酸乙酯組、氯仿組、全藥組分別灌胃給予相應提取物 12g / kg，陽性藥物組給予銀杏黃酮 5． 785mg / kg，老年組和青年組分別灌胃等容量生理鹽水，連續 30d。檢測大鼠在 Morris 水迷宮中的定位航行能力、空間探索能力，并檢測大鼠腦組織中乙酰膽堿酯酶、乙酰膽堿轉移 酶、谷胱甘肽過氧化物酶活性、總超氧岐化酶活性、過氧化氫酶活性及丙二醛含量。結果: 覆盆子乙酸乙酯組、覆盆子氯仿組、覆盆 子全藥組均可不同程度縮短大鼠的逃避潛伏期，明顯增加穿越平臺次數; 覆盆子乙酸乙酯組、覆盆子氯仿組、覆盆子全藥組、銀杏黃 酮陽性組可明顯提高老年大鼠腦組織中的乙酰膽堿轉移酶活性，同時覆盆子乙酸乙酯組、覆盆子氯仿組、銀杏黃酮陽性組降低乙酰 膽堿酯酶活性; 覆盆子乙酸乙酯組、覆盆子氯仿組、覆盆子全藥組、銀杏黃酮陽性組可明顯升高老年大鼠腦組織總超氧岐化酶、過氧 化氫酶活性，明顯降低丙二醛含量; 覆盆子乙酸乙酯組、覆盆子氯仿組、銀杏黃酮陽性組可明顯升高谷胱甘肽過氧化物酶酶活性。

結論: 覆盆子乙酸乙酯部位能提高自然衰老大鼠的學習記憶能力，因為其提高老年大鼠腦部膽堿能功能和減少腦部自由基損傷最 為明顯，其次是氯仿部位，最后是全藥部位。

關鍵詞 覆盆子萃取部位; 學習記憶; Morris 水迷宮; 衰老

現代藥理研究發現，覆盆子作用廣泛，除延緩衰老外、還有對生殖系統的調節作用、抗氧化作用等。我們前期發現覆盆子氯仿提取部位和乙酸乙酯提取部位對 D-半乳糖聯合氫化可的松造成的腎陽虛型癡呆大鼠和東莨菪堿所致的學習記憶障礙

大鼠有很明顯的改善其學習記憶的作用［1，2］，但對自然衰老大鼠學習記憶功能的影響尚無文獻報道。故本研究以自然衰老的大鼠為研究對象，觀察覆盆子各有效部位對大鼠學習記憶能力以及腦組織中與學習記憶和衰老相關的酶及衰老相關代謝產物的影響，從而進一步研究覆盆子改善學習記憶的機制與物質基礎。

1.材料與方法

1．1 試驗藥物  覆盆子購于江西省樟樹藥材市場，由江西中醫藥大學中藥資源學科組劉慶華老師鑒定為薔薇科懸鉤子屬值物掌葉覆盆子 Ｒubus chingii Hu 的未成熟果。經鑒定該藥材質 量符合 2010 版中國藥典要求。取覆盆子藥材粉末 80% 乙醇滲 漉，回收乙醇得浸膏。浸膏用水混懸，依次用氯仿、乙酸乙酯萃 取，得到覆盆子全藥、氯仿、乙酸乙酯共三個部位，由江西中醫藥 大學藥物分析室謝一輝教授制備，-20℃ 保存，臨用前稀釋至覆 盆子全藥 

1．2g 生藥 / ml、乙酸乙酯部位 1． 2g 生藥 / ml、氯仿部位

1．2g 生藥 / ml ; 陽性藥銀杏葉片，深圳海王藥業有限公司，批號:20121004。

1． 2 動物 18 月齡 SD 大鼠，SPF 級，50 只，雌雄各半，體質重 ( 500 ± 20) g; 3 月齡 SD 青年大鼠，SPF 級，10 只，雌雄各半，體質 重( 220 ± 20) g。均由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供， 許可證為: SCXK( 湘) 2009-0004。

 1．3 試劑 乙酰膽堿酯酶試劑盒，批號: 20140122，乙酰膽堿 轉移酶試劑盒，批號: 20140119，谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒，批 號: 20130927，總超氧岐化酶試劑盒，批號: 20130926，過氧化氫酶試劑盒，批號: 20131012，丙二醛試劑盒，批號: 20130927，均購自南京建成試劑有限公司。

 1．4  儀器   Morris 水迷宮，北京眾實迪創科技發展有限責任公司; 萬分之一分析天平，Sartorius，德國; -80℃ 冰箱，Thermo，美國。

 1.5 方法 大鼠進行隨機分成 5 組，分別為老年組、銀杏黃酮 陽性組、覆盆子乙酸乙酯組、氯仿組、全藥組，另設青年組( 為 3個月齡的 SD 大鼠) 。青年組和老年組灌胃生理鹽水 1m1 /100g，乙酸乙酯組、氯仿組、全藥組分別灌胃給予覆盆子相應萃取部12g 生藥 / kg，銀杏黃酮陽性組給予銀杏黃酮 5． 785mg / kg，給藥 容量 1m1 /100g，連續 1 個月。

1．5．1 定位航行試驗 共 5 天，面向池壁將大鼠分別從三個不 同象限的入水點放入水中，記錄其在 60 秒內尋找到平臺所用的 時間，此是逃避潛伏期( escape latency) 。大鼠如果 60 秒內找不 到平臺則由實驗操作者牽引實驗大鼠停留在平臺上 10 ～ 15s，參與文獻［4］進行。

 1．5．2  空間探索試驗  實驗第 6 天，撤除平臺，任意選擇 1 個

入水點將大鼠放入水中，記錄其 60 秒內: 動物穿越虛擬平臺的 次數; 空間探索試驗中在原平臺所在象限活動時間和動物在目 標象限( 原平臺所在象限) 游泳路程。

1.5．3 乙酰膽堿酯酶、乙酰膽堿轉移酶活性檢測 水迷宮實驗 結束后，取腦組織，進行組織勻漿，制成 10% 的勻漿液，檢測乙 酰膽堿酯酶、乙酰膽堿轉移酶活性，具體方法按試劑盒說明書進行。

 1．5．4 總超氧岐化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶活性 及丙二醛含量檢測 取腦組織 10% 的勻漿液進行 總超氧岐化 酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶活性及丙二醛含量檢測， 具體方法按試劑盒說明書進行。

1.結果

2．1 覆盆子各提取部位大鼠學習記憶的影響 ( Morris 水迷宮 法) 在水迷宮實驗中: 與青年組比較，老年組大鼠逃避潛伏期 明顯延長，穿越平臺次數明顯減少，提示老年組大鼠學習記憶 功能降低; 與老年組大鼠比較，乙酸乙酯組、氯仿組、全藥組、銀杏黃酮陽性組大鼠逃避潛伏期明顯縮短，穿越平臺次數明顯增加。而各給藥組中覆盆子乙酸乙酯組對大鼠逃避潛伏期有更顯著的縮短，且穿越平臺次數增加更明顯，結果見表 1、2。

表 1  覆盆子不同萃取部位對自然衰老大鼠逃避潛伏期的影響 ( x珋± s，秒)