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  • 發布時間:2020-06-16 14:51 原文鏈接: 誘導多能干細胞毒性實驗(二)

    Figure 3. 化合物IC50值由曲線擬合給出

    采用SoftMax Pro軟件的曲線擬合功能,確定四種不同的化合物的IC50值。

    神經元

    神經元的毒性體現在數量減少或神經突觸的長度減少上(甚至存在于不影響細胞的數量或存活力的情況下)。通過成像實驗不僅可以檢測神經元細胞的主體,同時還可以檢測神經元細胞的軸突和樹突,提供了更多的細胞生長信息。
    iPSC-神經元細胞以5,000 cells/孔種于384孔板,培養5天,然后加入按照1:2梯度稀釋的視黃酸,四復孔排列,24小時處理,然后固定細胞,并使用AlexaFluor 488標記的微管蛋白抗體染色。
    每個觀察視野可以觀測超過2000個細胞,接近30%的孔面積,然后使用SoftMax Pro軟件內的細胞計數分析模塊進行分析(Figure 4)。

    毒性實驗的更多信息

    SpectraMax MiniMax 細胞成像系統可以提供細胞圖像數據和細胞形態信息,可以補充讀板機只有熒光強度的微孔板數據。其他如細胞計數、細胞密度等參數設置在評價化合物的iPSC肝細胞或神經元細胞毒性方面有著很高價值。

    Figure 4. 視黃酸對于神經突增生的濃度依賴抑制效應

    覆蓋 (%)

                               

    Top:隨著視黃酸的濃度增加(從上往下,第一排為對照),神經軸突的生長減少。紫色疊圖(右列)為識別的細胞和神經軸突。
    Right:根據濃度和疊圖區域面積進行曲線擬合作圖


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