質粒DNA的小量制備實驗——煮沸小量制備法

細菌克隆

LB培養基抗生素STET溶液卵清溶菌酶水異丙醇TE緩沖液

1.  接種一個單菌落于5 ml LB培養基中，于37°C培養至飽和狀態或至少到對數生長中期（約6 h）。

2.  取1.5 ml菌液以最大轉速離心20 s，棄上清。

3.  加入300 μl含200 μg溶菌酶的STET溶液重懸沉淀。在渦旋混合器上振蕩混勻，冰上放置 30 s~10 min。

4.  將管放人沸水中（100°C）1-2 min。

5.  離心15-30 min，吸上清移入一個新的微量離心管中。

6.  加人200 μl預冷的異丙醇，于-20°C放置15-30 min。

7.  以最大轉速離心 5min，倒轉離心管，彈數次，去除上清，真空干燥直至沉淀呈透明。

8.  沉淀溶于50 μl TE緩沖液中，于4°C短期保存，于-20°C或-70°C長期保存。取5 μl進行限制酶酶切分析。

1.  為了獲得高產量的DNA，一定要使菌體完全重懸。

2.  如有必要，往待消化混合液中加人10 mg/ml RNA酶溶液（不含DNA酶，見3. 10)以去除 污染的RNA。

1.  參考文獻：Birnboim，1983； Heetal., 1991; Holmes and Quigley, 1981.

2.  撰稿人：JoAnneEngebrecht, Roger Brent, and Mustak A, Kaderbhai