獲得性免疫缺陷綜合征( AIDS)是由人免疫缺陷 病毒(HIV)引起的嚴重危害人類健康的傳染病,以損傷免疫系統為主要特征,患者極易獲得機會性感染, 而新型隱球菌、馬爾尼菲藍狀菌等深部真菌的機會性 感染是AIDS患者死亡的主要原因之一[ 1]。新型隱球 菌最常引起的感染為隱球菌性腦膜炎,其發病隱匿、 病死率高。患者主要表現為難以忍受的頭痛,伴發 熱、惡心、嘔吐,腦膜刺激征陽性等腦膜炎的癥狀與體 征[ 2]。隱球菌性腦膜炎在健康人群中很少發生,但在 AIDS患者中發病率較高。馬爾尼菲藍狀菌是一種條 件性高致病性真菌,同時也是青霉菌屬中唯一的雙向 真菌,主要侵襲免疫低下的人群,尤其是AIDS患者。 其臨床表現復雜多樣且缺乏特異性,有文獻報道, 85%的馬爾尼菲藍狀菌感染發生于AIDS患者,已成 為AIDS臨床診斷的指征性癥狀之一[ 3]。 基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(MALDI TOF MS)是一種新型軟電離生物質譜技術,通過檢 測每種病原菌特征性的蛋白指紋圖譜,并與數據庫中 的圖譜 庫 進 行 比 對 即 可 鑒 定 出 待 測 病 原 菌。將 MALDI -TOF MS聯合分離膠促凝管直接檢測血培 養陽性瓶中的病原菌,可以極大地縮短檢測時間[ 4], 為臨床提供可靠的診斷依據。 本文通過回顧分析2例明確診斷的合并真菌感 染的AIDS病例,探討質譜鑒定對AIDS患者合并真 菌感染診斷的臨床價值。
1 病例資料
1. 1 一般資料 2018年9月常州市第一人民醫院呼 吸科及血液科收治的2例合并真菌感染的 HIV患 者。病例1,男, 56歲,因“咳嗽伴乏力、納差半月余” 入院。患者入院前1月無誘因出現陣發性咳嗽, 1周 前至當地醫院就診查胸片提示支氣管炎,予“順爾寧、 蘇黃止咳膠囊”,癥狀無改善,后出現乏力、納差進行 性加重。2 d前進食后嘔吐少許胃內容物,于本院門 診就診并行相關檢查。患者自述自起病來進食逐步 減少,體質量減輕約5 kg。患者神志清,精神萎,慢性 病面容。胸部CT示右肺下葉多發空腔性病變,多發 肺大皰伴感染,右肺下葉外基底段結節,右肺上葉后 段少許炎癥,左肺多發纖維灶。病程中患者出現一次 發作性雙眼上翻,持續數秒后好轉;嗜睡,呼之睜眼, 頸部稍有抵抗。診斷為:肺部陰影:真菌感染可能;腦 炎(真菌性可能)。病例2,女, 39歲,因“發現鎖骨上 淋巴結腫大2周余”入院。患者2周前無明顯誘因發 現左側鎖骨上淋巴結酸痛腫大,伴有咳嗽、咳痰、發 熱,并感全身乏力、頭暈不適。患者病程中有暈厥1 次,約15 s后意識恢復。患者體溫39 ℃,神志清,精 神萎。正電子發射計算機斷層顯像示多發淋巴結氟 代脫氧葡萄糖代謝增高,考慮淋巴瘤浸潤;左上肺磨玻璃影結節氟代脫氧葡萄糖代謝增高;兩肺局部輕度 炎癥,右中肺微小結節。診斷為:淋巴結腫大待查、肺 部感染。
1. 2 MALDI -TOF MS鑒定 抽取5 mL陽性血培 養液注入分離膠促凝管,需氧瓶抽取的血培養液以 4 000 r /mi n離心10 mi n,厭氧瓶中抽取的培養液經 3 500 r /mi n離心7 mi n,分離待測病原菌。棄去分離 膠促凝管內上層液體,緩慢注入1 mL無菌蒸餾水將 待測菌沉淀混懸(不破壞促凝膠),將混懸液轉移至無 菌1. 5 mL小 型 離 心 管 中,經13 000 r /mi n離 心 1 mi n。棄去上清液后重復洗滌一次,最后將離心后 管底的細菌混懸于1 mL無菌蒸餾水中待檢。取 300 μL待測菌重懸液與900 μL無水乙醇混合,經13000 r /mi n離心1 mi n后棄去上清液,再經多次離心 以完全去除殘留的無水乙醇,放置于空氣中自然干 燥。加入70%甲酸30 μL使待測菌充分混勻,再加入 乙腈30 μL旋渦混勻,經13 000 r /mi n離心2 mi n,取 上清液用于 MALDI -TOF MS鑒定。取制備好的上 清液1 μL涂布于96孔金屬靶板,室溫干燥后在金屬 靶板表面加入基質液α -氰4 -羥基肉桂酸1 μL,再次 室溫干燥后進行檢測。參數設置:線性,正離子,蛋白 峰譜m/z范圍2~20 ×10 3,激光解析每孔100次。 應用B i o t ype r 3. 0統 進 行 數 據 庫 比 對,得 出 鑒 定 結果。
1. 3 API 20 C板條鑒定 抽取血培養瓶中的培養液 進行純培養,將分離到的菌落用無菌生理鹽水配制成 2個麥氏單位待測菌懸液,取100 μL懸液至API CMed i um培養基中,混勻后加入鑒定板條, 28 ℃培養 72 h后進行結果判讀。