一、紅細胞檢查
㈠ 紅細胞計數（目視計數法）
【要求】熟悉血細胞計數方法，掌握紅細胞計數參考值及臨床意義。
【原理】 用紅細胞稀釋液將定量血液稀釋一定倍數，置于血細胞計數板內，于顯微鏡下計數一定容積內的紅細胞數，然后再計算出每升血液內的紅細胞數。
【試劑】
紅細胞稀釋液 [赫姆（Hayem）稀釋液]
氯化鈉1.0g 硫酸鈉（Na2 SO4·10H2O） 5.0g （或無水硫酸鈉2.5g）
氯化高汞0.5g 蒸餾水加至200.0ml，過濾后備用。
【器材與儀器】
1．試管、玻棒、2ml玻璃吸管、顯微鏡。
2．一次性微量吸管：上有10μｌ及20μｌ的刻度線。
3．血細胞計數板：血細胞計數板中央有兩個刻度平臺（即血細胞計數池），每個平臺劃分為9個大方格，每個大方格長寬各為1mm，其面積為1mm2，加蓋玻片后的深度為0.1mm，故每一大方格的容積為0.1mm3(0.1μｌ)。四角的四個大方格等分為16個中方格，作為白細胞計數用(見圖1)； 中央一大方格用雙線等分為25個中方格，每個中方格又等分為16個小方格，作為紅細胞和血小板計數之用(見圖1-2)。
【操作】
1．取試管一支，準確加入紅細胞稀釋液2ml。
2．消毒皮膚，用采血針刺破皮膚，使血液自動流出，拭去第一滴血，用一次性微量吸管準確取血10μl。
3．擦去管尖外面多余的血液，將吸管插入稀釋液底部，輕輕將血全部排出，然后吸取其上清液清洗吸管內殘余血液2～3次。
4．混勻后用玻棒沾取紅細胞懸液，充入血細胞計數池內，注意充池的液量要適宜，使之恰好充滿，無氣泡及多余液體溢出。靜置2～3min，待紅細胞下沉后進行計數。
5．將血細胞計數板置于顯微鏡下，用低倍鏡觀察計數池內紅細胞分布狀況是否均勻，如紅細胞分布均勻，即可用高倍鏡進行計數。計數中央大方格中的四個角上和中心的中方格（共5個中方格）的紅細胞。為準確計數，對于壓在線上的細胞計數可采用壓在相鄰的兩側線者計入（如左側及上側），壓在另相鄰的兩側（如右側及下側）線者不計數的原則進行計數(即數上不數下，數左不數右)。
6．計算：將5個中方格所得的紅細胞數的總和(N)乘以10,000即為每微升(μl)血液內的紅細胞數，再乘106換算為每升（L）血液內的紅細胞數。
7．計數完畢后,用清水將計數盤和蓋玻片沖洗干凈，待干后備用。
【注意事項】
1．顯微鏡物鏡接近計數板時應注意，勿損壞計數板及鏡頭。
2．計數時進入顯微鏡的光線要適中，否則不易找到方格。計數池內的細胞分布要均勻，各中方格的細胞相差不應超過±10%，否則重新計數。
3．計數不準確的常見原因：
（1）采血不符合要求，如局部皮膚水腫、炎癥、穿刺過淺、過度擠壓等。
（2）稀釋液量不準，特別在夏季，稀釋液放置過久，水份蒸發。
（3）操作太慢，血液凝固。
（4）如微量吸管內壁沾有白細胞稀釋液，會使紅細胞破壞，故應先做紅細胞計數。
（5）紅細胞懸液混勻不充分。
（6）計數池充池不均勻，或充滿后移動蓋玻片。
（7）計數時對壓在線上的紅細胞，未按壓線紅細胞計數原則進行計數，造成遺漏或重復。
(8) 當白細胞極度增多時，將使紅細胞計數結果假性偏高，故應對紅細胞計數結果進行校正。校正方法：校正后紅細胞計數結果＝校正前紅細胞計數結果-白細胞計數結果
【參考值】 成年男性（4.0～5.5）×1012/L
成年女性（3.5～5.0）×1012/L
新生兒 （6.0～7.0）×1012/L
【臨床意義】
1.紅細胞的增多
（1）相對性增多 如劇烈嘔吐、嚴重腹瀉、大面積燒傷、大汗、多尿等，使體內水分喪失過多，導致血液濃縮。
（2）絕對性增多 多由于缺氧而致紅細胞代償增多，紅細胞增多的程度與缺氧程度成正比。少數病例是由造血系統疾病所致。
1)生理性增多： 胎兒、新生兒、高原居民。當劇烈的體力勞動和體育活動后、情緒激動時，紅細胞也可一時性增多。
2)病理性增多： 見于慢性心肺功能不全疾患如肺氣腫、肺原性心臟病及某些紫紺型先天性心臟病等。此外真性紅細胞增多癥時，紅細胞增多可達（7.0～10.0）×1012/L。
2．紅細胞的減少
（1）生理性減少 見于妊娠中、晚期和肝硬化時，血容量增加血液稀釋，紅細胞相對減少。
（2）病理性減少 是指血中紅細胞絕對數量減少。見于造血功能障礙、造血原料供應不足，紅細胞丟失和破壞過多等原因引起的各種貧血。
㈡ 血紅蛋白測定（氰化高鐵血紅蛋白測定法）
【要求】 熟悉氰化高鐵血紅蛋白測定方法，掌握血紅蛋白測定的參考值和臨床意義。
【原理】 高鐵氰化鉀能使血紅蛋白中的二價鐵氧化成三價鐵，形成高鐵血紅蛋白。后者再與氰離子結合，形成穩定的氰化高鐵血紅蛋白（hemoglobin cyanide，HiCN）。氰化高鐵血紅蛋白的最大吸收峰在波長540nm，可用標準的高精度的分光光度計定量測定，其吸光度與血紅蛋白濃度成比例。
【試劑】
氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)轉化液：
氰化鉀（KCN） 0.05g , 高鐵氰化鉀[K3Fe(CN)6] 0.20g,
非離子表面活性劑(Triton X-100)0.5～1.0ml , 無水磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.14g
蒸餾水加至1000ml,糾正PH至7.0～7.4。
血紅蛋白轉化液均為淡黃色透明溶液，配成后用濾紙過濾，置棕色瓶中，在室溫中可保存數月，在冰箱中穩定時間更長，但勿使結冰。該液以H2O為空白，于540nm測其吸光度應＜0.001。
【器材與儀器】試管、刻度吸管、微量吸管、分光光度計。
【操作】
1．血紅蛋白轉化：取HiCN轉化液5ml，用微量吸管取末梢血20μl，加入HiCN轉化液中，充分混勻，靜置5min，使充分反應。
2．比色：用分光光度計比色，波長540nm，光徑1.0cm，以轉化液或蒸餾水為空白，測定樣本吸光度（A）。
3．如果使用符合WHO標準的分光光度計，可根據樣本吸光度（A）直接計算血紅蛋白濃度。
4．當使用的分光光度計不符合WHO標準時，可先使用已知濃度的血紅蛋白標準液制作HiCN的標準曲線，然后根據樣本吸光度在標準曲線上查取血紅蛋白濃度。
【注意事項】
1．使用光電比色計之前須校正儀器。
2．采血用的血紅蛋白吸管20μl的準確性應在±1%以內，5.0ml移液管的準確性在± 0.5%以內。當使用標準曲線時，應定期對標準曲線進行校正。
3．樣品在讀數前應清晰，如發生混濁，可能有以下幾種情況：
（1）血中白細胞過多，可離心后取上清比色。
（2）血中有異常球蛋白，可在溶液中加0.1g碳酸鉀。
（3）有硫化血紅蛋白或血紅蛋白C時，則可用蒸餾水按1∶1稀釋，結果乘以2即可。
（4）氰化試劑是劇毒品，在配試劑時要嚴格按劇毒品操作。如發現變綠、變混則不能使用，pH低于7.0時應進行調整。
4．血紅蛋白轉化液不能貯存在塑料瓶中，否則CN-濃度下降，致使結果偏低。
【參考值】
成年男性 120～160g/L