微量元素硒在醫學領域有著十分重要的生物學意義,并與人體健康有密切關系,是人體必需的微量元素〔1〕。貫眾是中藥常用品種,其根莖含有多種藥用成份,具有抑菌、抗病毒、驅蟲,收縮子宮平滑肌,止血,治熱毒或食毒,治流腦和乙腦等溫熱病、抗腫瘤、抗早孕、墮胎、雌激素樣作用及抗白血病等作用〔1〕。本文用原子熒光光譜法〔2
,3〕(AFS) 對蹄蓋蕨科植物,多齡蹄蓋蕨(Lunathyrium acrostichoides ching)
貫眾中硒的含量進行了測定分析,旨在探討硒與貫眾藥性的關系,為貫眾的開
發利用提供參考依據。
1 ?材料與方法
1.1 ?材料
1.1.1 ?藥材?貫眾采集于吉林省樺甸縣(經吉林大學藥學院王廣樹教授鑒定為蹄蓋蕨科植物,多齒蹄蓋蕨。根莖猴腿蹄蓋蕨) 。
1.1.2 ?儀器?AFS - 230E 原子熒光光度計(北京海光儀器公司) 。
1.1.3 ?試劑?硝酸, 30 %過氧化氫, 鹽酸(均為優級醇) 。20 %硼氫化鉀溶液,10 %鐵氰化鉀溶液,1 mg/ ml 硒標準儲備液,1100μm/ ml 硒標準使用(由儲備液稀釋而得) 。
1.2
?儀器工作條件?光電倍增管負高壓:300 V ;空心陰極燈電流:80 mA ;原子化器溫度:800 ℃:原子化器高度:8
mm;載氣流速:400 ml/ min ;屏蔽氣流速:1 000 ml/ min ;測量方式:標準曲線法;讀數方式:峰面積;延遲時間:110 s
;讀數時間:10s ;進樣體積:015ml 。
1.3
?標準曲線的繪制?將0100 , 0150 , 1100 , 2100 , 4100 ,8100 ml 硒標準使用液置于100 ml
容量瓶中,加10 %鐵氰化鉀溶液1 ml ,用10 %鹽酸溶液定容到刻度,此標準系列每ml含硒0100 ,510 ,1010 ,2010
,4010 ,8010 ng。按所述儀器條件測定,繪制濃度(C) - 熒光強度( IF) 標準曲線,該標準曲線的線性回歸方程為Y( If) =
621899 ×C + 171718 ,相關系數( r)= 01999 1 。
1.4
?樣品處理?準確稱取約015 g 均勻的試樣于聚四氟乙烯罐中,加入3 ml 硝酸,放置過夜,加2 ml
過氧化氫,放入外套中,置于烘箱中,于125 ℃加熱消解4 h。自然冷卻后,取出溶樣杯,定容至25 ml 于電熱板上100
℃加熱至棕色煙冒盡。再加入210 ml 濃鹽酸定容至刻度。若樣品中硒的含量較少,可定容分取,直接加熱趕酸測定硒的含量。
2 ?結?果
2.1
?消解試劑的選擇?本文試驗了硝酸,硝酸- 硫酸(V/ V ,4 :1) ,硝酸- 過氧化氫(V/ V ,3 :2)
對消解效果的影響。試驗證明,使用硝酸不完全,消解液有混濁。硝酸- 硫酸由于殘余的硫酸和二氧化硫難以除去,干擾以后的測定。而硝酸-
過氧化氫不僅消化時間短,效果好,而且帶入的干擾也較少。本文選用硝酸- 過氧化氫體系作為消解劑。
2.2 ?載流濃度對測定的影響?本文試驗了載流濃度對硒測定信號的影響,結查表明,隨著載流濃度的增加,硒的熒光信號呈上升趨勢,當鹽酸體積分數為5 %時熒光強度達最大值,因此,載流濃度選擇5 %鹽酸。
2.3 ?硼氫化鉀濃度對測定影響?硒的測定與砷類似,對硼氫化鉀濃度的要求較高,當硼氫化鉀的濃度低于5g/ L ,時,熒光信號很低,當硼氫化鉀的濃度> 5 g/ L 時,信號漸漸升高,至20 g/ L 時熒光信號開始下降,實驗中選擇氫化鉀的濃度為
15g/ L 即可滿足測定要求。
2.4 ?鐵氧化鉀濃度對測定的影響?銅干擾硒的測定,尤其是當銅的含量較高時,加入適當的鐵氰化鉀可掩蔽銅,其濃度對測定的影響不大,由于貫眾中的銅含量不高,因此實驗加入1ml 10 %的鐵氰化鉀即可滿足測定要求。
2.5 ?共存離子的干擾及消除?按照試驗方法,控制相對誤差±5 % ,固定硒濃度10 ng/ L ,分別加入其他離子進行干擾試驗。結果表明,樣液中的堿金屬不會產生干擾。可形成氫化物的汞、砷、鉛、錫也不會產生干擾。當加入1 ml 10 %鐵氰化鉀溶液測定10 ng/ L ,分別加入其他離子進行干擾試驗。結果表明,樣液中的堿金屬不會產生干擾。可形成氫化物的汞、砷、鉛,錫也不會產生干擾。當加入1 ml 10 %鐵氰化鉀溶液測定10 ng/ L 硒時,允許下列元素存在(mg/ L) : K、Ca、Mg、Al 、Cu(100) ,Fe (50) ,Co 、Ni (10) ,As、Hg (015) 。樣品中所含量均小于上述所列。因此,樣品在進行消解后可不考慮其他元素的干擾。
2.6 ?方法的線性范圍與檢出限?測定空白溶液11 次,得出儀器的最低檢出限為012μg/ L。本法的線性范圍0～100mg/ L ,按取樣量110 g ,本次貫眾中硒的最低檢出限為410 ×10- 3 mg/ kg。
2.7 ?精密度試驗?稱取110 g 樣品按上述實驗方法消化處理重復測定5 次,測量值為01789 ,01790 ,01825 ,01768 ,01810 mg/kg ,平均值為01796μg/ kg ,其相對標準偏差(RSD) 為212 %。
2.8 ?回收率試驗?采用加標法做回收率實驗,結果表明,硒的平均回收率( n = 5) 為10018 %～11513 % ,證明了方法的可行性。
3 ?結?論
通過對消解試劑、干擾因素的選擇和討論,建立了原子熒光法測定貫眾中硒含量的檢測方法,本方法操作簡單,結果穩定可靠。從實驗結果可見,作為入藥部位的貫眾根中含有較多的硒,而不作為入藥部位的貫眾須中含硒較少,由此還不能
得出貫眾的藥性跟其硒含量完全有關,但也不排除這種可能。
參考文獻
〔1〕?王夔,徐輝碧,唐任寰,等. 生命科學中的微量元素[M] . 北京:中國計量出版社,1992 :354 - 381.
〔2〕?李晨旭,牛鳳蘭,甘振威,等. 城市道路邊蔬菜中砷汞鉛含量檢測[J ] . 中國公共衛生,2006 ,22 (3) :359.
〔3〕?李晨旭,牛鳳蘭,韓鴻雁,等. 未成年人發中多種無機元素分布規律及相關性[J ] . 中國公共衛生,2005 ,21 (11) :1371 - 1372.