賽默飛世爾(原戴安)液相色譜操作規程U3000

一、操作前準備： 1.1流動相的配制：
1.1.1根據所供試品的性質、相關的文獻資料、工作經驗等按比例配制流動相。
1.1.2根據流動相的性質確定采用有機膜（0.45um）還是水相膜(0.45um)對流動相進行過濾。 1.1.3將過濾后的流動相進行超聲脫氣10~15分鐘。 1.2對照品供試品處理：
1.2.1稱取或量取適量的對照品或供試品，用適當的溶劑（最好采用流動相或流動相的主成分）進行充分溶解（也可借助超聲波進行超聲溶解），使其濃度為0.1~1mg/mL（根據檢測結果再適當調節溶液的濃度）。
1.2.2根據對照品或供試品的性質確定采用有機針頭濾膜（0.45um）還是水相針頭濾膜(0.45um)進行過濾。
1.3色譜柱的選擇：根據樣品的性質選擇適當的色譜柱。

二、開機：
2.1打開UPS（不間斷電源）電源，打開儀器接線板電源開關；

2.2打開電腦顯示器電源，打開電腦主機電源（POWER），啟動電腦；

2.3依次打開泵、自動進樣器、柱溫箱、檢測器的電源；
2.4雙擊屏幕右下角“服務管理器”快捷圖標,出現對話界面后點擊“啟動儀器控制器”啟動,等顯示“本地儀器控制器 運行空閑”,可以關閉界面。

2.5雙擊在桌面上的Chromeleon 7圖標（工作站主程序）。

2.6在左下方點擊儀器，則在右邊會自動顯示該儀器控制面板。
2.7旋開泵上的排液閥(兩圈以上)；設置A通道為100%，點擊“沖洗”，然后再出現的對話框中點擊“忽略并執行”；（默認沖洗5分鐘）；然后分別“沖洗”流路中其他通道氣泡；排完氣泡后關閉排液閥；
2.8設置流動相的比例及流速后，點擊“馬達”。此時泵自動會以設置的流速進行運行。

2.9在控制面板“柱溫箱”控制框中，設置準備分析樣品所使用的柱溫箱溫度。

3.0清洗進樣器：依次執行灌注注射器，清洗緩沖環，外部清洗針。

三、樣品分析：

3.1建立儀器方法：
3.2建立處理方法及報告模板（此步驟可以省略，直接調用以前的）：

3.3建立序列：
3.4打開氘燈（待系統壓力穩定后約15min后再開燈）：在控制面板“Detector”控制框中，選中“紫外燈”選框，及“可見燈”選框（如果波長在可見范圍）。
3.5在控制面板“UV”控制框中，設置波長，采集頻率（10HZ），時間常數（0.5s）；點擊“監視基線”，選中通道1并確定。
3.6待基線穩定后，點擊“監視基線”，點擊確定，關閉查看基線。
3.7點擊左下方“數據”，并選中要分析的序列，然后點擊“開始”啟動樣品表進行分析（如果序列里有完成的樣品，則會變成繼續，點繼續；如果該序列還在隊列中則會顯示刪除，點擊刪除后在點擊繼續）；
3.8樣品全部檢測結束后，如果不再分析樣品應立即關掉氘燈，延長氘燈使用的壽命

四、數據處理：

4.1處理標準曲線；

4.2打印標準曲線；

4.3打印樣品報告。

五、關機：
5.1沖洗色譜柱（如果使用了緩沖鹽，首先使用10%甲醇水溶液沖洗色譜柱30分鐘，然后使用純甲醇沖洗色譜柱30分鐘）。
5.2關閉泵馬達，斷開連接，關閉工作站。
5.4關閉檢測器、柱溫箱、自動進樣器、泵的電源。

5.5關閉計算機。關閉UPS電源或穩壓電源。

六、注意事項：
6.1溶劑泵的使用注意事項：
（1） 使用時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完，否則空泵運轉會磨損柱塞、缸體和密
封環，最終產生漏夜。
（2） 防止任何固體微粒進入泵體，因為塵埃或其他任何雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、
缸體和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體顆粒。流動相過濾，可采用濾膜（0.2um或0.45um）等濾過。
（3） 輸液泵的工作壓力不能超過規定的最高壓力，否則會使高壓密封環變形，產生漏夜。

（4） 流動相應該先脫氣，以免在泵內產生氣泡，影響流量的穩定性，如果有大量的氣泡， 
泵就無法正常工作。
（5） 溶劑泵長期不用時，用甲醇以1.0ml/min沖洗各個通道。

（6） 泵的清洗液要勤換。
（7） 每次開啟泵之前要排除管道中是氣泡。
（8） 流動相由無機鹽溶液轉換有機溶劑前要用90%去離子水清洗管路。

（9） 轉換不同流動相時注意兩者是否容易混合或者發生反應。

（10）長期不用或運輸前要到空清洗液瓶。

6.2色譜柱的使用注意事項：
（1） 避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高
處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，進樣閥的轉動不能過緩。
（2） 一般說來色譜柱不能反沖，只有生產廠家指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去
留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。
（3） 選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器
前連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析之前被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質被破壞。
（4） 避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內，需要對樣品進行預處理或
者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是有相似固定相的短柱，也有用浸透限制固定相短柱。保護柱可以經常更換。
（5） 保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發干燥。絕
對禁止將緩沖液留在柱內靜置過夜或更長時間。
6.3檢測器的使用注意事項：
（1） 長時間檢測池中無流動相流動時，關閉檢測器氘燈。

（2） 不要將物品或其他儀器檔住檢測器的散熱孔。
（3） 檢測器安裝的位置應沒有震動，溫度變化不大，避免陽光直射。
（4） 在關燈命令發出后，再次開燈須等待5分鐘以上的時間。否則燈會因為過熱而損
壞。