2013年4月24日,第四屆中國上海化學與藥物結構分析會議(Chemical &Pharmaceutical Structure
Analysis) (CPSA Shanghai
2013)在上海浦東新區淳大萬麗酒店召開,來自國際知名藥企、跨國大制藥公司、生物醫藥研究所和高校的高管、專家、學者百余人參加了本次會議。大會第一天舉行了主題為藥物發現與開發相關的會前研討會。賽默飛世爾科技作為本屆大會贊助商帶來其HR/AM質譜最新解決方案,并舉辦了CPSA 2013歡迎晚宴。
招待晚宴現場
晚宴由CPSA創始人Mike Lee先生主持,賽默飛世爾科技的Patrick Bennett先生和郝志奇女士為大家帶來精彩報告。
賽默飛世爾科技醫藥戰略營銷主任 Patrick Bennett先生
來自賽默飛世爾科技公司的醫藥戰略營銷主任Patrick Bennett先生帶來題為《大分子定量的高分辨/精確質量技術》(HR/AM Mass Spectrometry For Large Molecule Quantitation:why HR/AM?Why intact level?why peptide level or everything in-between?)的報告。Patrick Bennett先生主要介紹了大分子定量HR/AM和MRM方法對比,并分享了工作中的4個主要案例。
Patrick Bennett先生首先介紹了生物制藥醫藥發展的概況,以及生物制藥演示要求及目前的解決方案。蛋白質定量一般采用三種方法,第一種是最必須的Bottom-up方法,目標分析物是分解的多肽,它的優勢是絕對/精確定量,廣泛的可以達到3-4個數量級最低檢出限,以及高靈敏度(使用羥間唑啉);第二種是精確定量完整蛋白的重要選擇middle-up方法,其目標分析物是通過胃蛋白酶的Fab/Fc片段還原的L/H鏈,它的優勢在于準備樣品較少、同位素分辨質譜能夠精確定量,能夠保持部分原始序列信息;第三種是目前越來越引起大家興趣的完整蛋白質。目標分析物為單克隆抗體(mAb)或完整蛋白,它的優勢則在于無需樣品制備,能夠保持原始序列信息。
目前大分子生物分析中存在的挑戰是,實現精確和可重復性的大分子生物分析時要注意分析參數中靈敏度和樣品量的選擇性(特異性),線性動態范圍以及準確性。生物分析中為什么使用高分辨/精確質量HRAM呢?因為通過全掃描可以獲得大多數的信息,使用SIM 模式分析那些有很大可能性的信號,HRAM或者MS/MS進行進一步的分析確證。目前已有HRAM用于目標蛋白質分析的多篇論文發表。Patrick Bennett先生使用Q-Exactive Orbitrap質譜進行HRAM生物分析發現,全掃描可用于中等或大分子蛋白分析;選擇離子掃描SIM相對于全掃描FS在復雜的基質中明顯更好,適用于肽或小分子蛋白;平行反應監測PRM則是復雜基質肽分析的最好選擇。說到為什么是完整的蛋白組,首先減少了樣品的制備時間,在酶分解過程中將變異降到最低,可獲得質量和部分結構信息。
定量分析的基數是位于膜外的所有異構體在每一個帶電狀態下的總和。局限性表現在:當完整的蛋白不均勻時,就很難將目標離子與其他干擾、變異,不同的糖基區分開來;定量的結果將不會準確因為所有干擾離子的信號將與目標蛋白混合在一起。解決方案則可以把單克隆抗體(mAb)分解成為輕鏈和重鏈,然后則可以定量L/H鏈。
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賽默飛世爾科技 郝志奇女士
賽默飛世爾科技郝志奇女士為大家帶來《生物制藥表征的高分辨質譜法》報告。報告通過對單克隆抗體(mAb)的檢測分析,提出賽默飛公司Orbitrap質譜儀在測定分析物質時的優異性,并擁有更大更廣泛的適用范圍。
Orbitrap創新技術于2005年提出,基于Orbitrap技術的賽默飛質譜系列產品,以其高分辨率、高靈敏度和高可信度等無可比擬的優勢,廣泛應用于蛋白質組學、藥物分析、食品安全、環境檢測等行業。配有HR/AM定量功能,成為在完整蛋白、子結構和肽段水平精確表征mAb的絕佳選擇。HR/AM質譜可適用測定物質的范圍包括:擁有大于150kDa的大分子蛋白質、2條輕鏈、2條重鏈、16個二硫鍵等物質,還能用于測定聚糖異質性等。
郝志奇女士從儀器的構造和軟件方面重點介紹了Orbitrap質譜儀的主要特性,包括以下幾點:
1、測定分析的完整性、能夠對糖型識別、確定氨基酸序列、二硫鍵的確認等
2、擁有自動工作流系統——從收獲細胞培養到完整質量分析變異
3、擁有CESI-Orbitrap analysis分析系統,能夠鑒定多肽并繪制肽段譜圖
4、topdown方法測序單克隆抗體
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