赤霉素類物質濃度測定實驗

實驗方法原理:定量測定赤霉素類物質有許多方法：如大麥糊粉層α－淀粉酶誘導形成法，酸模葉片保綠法，小麥黃化苗第一葉片基部切斷伸長法，水稻幼苗第二葉葉鞘伸長的“點滴法”等。其中以水稻幼苗法較好。這一方法利用了赤霉素刺激幼嫩植物節間伸長的重要生理特性。在一定濃度范圍（0.1－100pp M ）內，葉鞘的伸長與濃度成正比。

實驗材料：水稻種子 

儀器、耗材：

燒杯                                                                 

高壓鍋                                                                 

玻璃箱                                                                  

玻璃尺

實驗步驟：

一、材料與設備

水稻種子

高約6cm 直徑約4cm 的玻璃杯或燒杯，高壓鍋，邊長約30cm 高約15cm 的正方形玻璃箱，1 MM 3微量注射器，能分辯1 MM 的玻璃尺。

藥品：

100pp M GA3:10毫克GA3溶于100  ml 50%丙酮中。

1%瓊脂：將稱好的瓊脂剪碎，按1：100（W/W）浸入水中，在15磅高壓下滅菌20分鐘。在瓊脂溶膠尚未凝固前倒入玻璃杯中，至溶膠高度達5cm 為止。

飽和漂白粉溶液

二、實驗步驟

1．取籽粒飽滿的水稻種子，用漂白粉溶液滅菌30分鐘，沖洗后再加適量的水，使能蓋過種子，在30℃黑暗中發芽2天。

2．種子露白后，選芽長2 M  M 的種子，胚芽朝上，排在小杯中的瓊脂凝膠上。每杯排放10粒左右種子（見圖6）。小杯放進玻璃箱內，蓋上蓋，放進恒溫培養箱中，在30℃，2000－6000勒克斯光照下培養2天。

圖1 選取芽鞘長達2毫米的種子放置                                           圖2 小心將1微升GA3的丙酮溶液

小杯內的瓊脂上在連續光照下培養              滴于胚芽鞘與第一葉之間

3．精選第二葉葉尖剛伸出第一葉，苗高0.9－1cm 的幼苗，將不符合的拔去。

4．用50%的丙酮將100pp M 的GA3稀釋成0.1，1.0，10，100pp M 的GA3溶液。

5．從恒溫培養箱中取出小燒杯，編號，分別用0.1，1.0，10，100pp M 的GA3處理，對照為50%丙酮溶液。處理方法為：用微量注射器將3 M  M 3GA3溶液小心滴于幼苗的胚芽鞘與第一葉葉腋之間（見圖7），勿使滑落。如小滴滑落，應立即拔除這一幼苗。每一濃度至少重復三杯。

6．所有點了樣的小杯再放入恒溫培養箱中培養3天。

7．測定第二葉葉鞘長度（如圖8）。

結果

以GA3濃度的對數為橫坐標，第二葉葉鞘長度為縱坐標，繪圖，此為標準曲線，從中可以查出待測樣品中的赤霉素類物質的活性相當于多少濃度GA3的活性。

圖3  實驗終了時測第二葉葉鞘的長度