超濾實用小技能

是否提供無熱源的超濾管

建議用Turbo系列，用1N NaOH溶液室溫浸泡1小時，3000g離心，棄去剩余溶液。在使用無熱源水3000g沖洗兩次注意，賽多利斯超濾離心管系列，只有Turbo可以進行上述操作，而其他材質的膜，要考慮對NaOH的耐受性。比如，相對于RC膜，經過NaOH處理后，將會影響過濾速度和回收效果。

需要濃縮到一定的倍數？其實可以通過超濾管控制

首先，Vivaspin超濾管有最小回收體積，保證至少回收30ul的樣本，并且不會讓過長的離心時間導致樣品離干。另外，如果需要濃縮一定的倍數，使用超濾管也可以直接完成，不需要另外的步驟。首先，預先計算外管液體達到濾過孔的刻度線的位置需要的體積，然后減去樣品要濾出的體積，就是需要預先加入外管的緩沖液的體積。先在外管中加入計算得到的緩沖液，待濾出液的體積流入外管緩沖液中，使液面達到濾出孔，則樣品不再濃縮，濃縮倍數得到了固定，看，樣品濃縮就是那么簡單！

可以用超濾管分離外泌體嗎

答案是可以的，除此之外核酸，納米微球顆粒，多糖，病毒都可以用超濾的方法，而且超濾不會破壞外泌體的結構。對于外泌體，推薦使用過濾設備進行雜質去除（Minisart或Sartolab RF/BT系列），然后用超濾設備（Vivaspin或Vivaflow系列）進行外泌體的濃縮。具體步驟如下：

a) 收集培養液，離心去除細胞和細胞碎片后，使用0.2um針頭式濾器（Minisart系列，適合1-100mL樣品）或正壓/負壓過濾器（Sartolab RF/BT系列，適合100-15,000mL樣品）過濾去除囊泡等大顆粒物質

b) 樣品使用Vivaspin超濾管（≤20mL），Vivacell超濾杯（20-250mL），或vivaflow 膜包（100ml-5L）超濾制備外泌小體。

最后要補充的是，超濾是大分子脫鹽、濃縮最方便的方法！它重復性好，已經在蛋白、抗體、病毒、外泌體、核酸、囊泡等樣品制備中建立標準操作。所以，聽說真正會用正確使用超濾管的文化人都在用賽多利斯的兼具年代感和時尚feel的超濾管啦！快點來看看我們詳細的說明，選擇一款你順手合心的濃縮神器吧！

Vivaspin超濾管系列具有ZL的尖角死體積樣品安全保護技術，防意外甩干，給珍貴的樣品更多一道保障！另外，根據蛋白的分子量和體積的不同，Vivaspin系列有多達24種不同選擇。樣品處理體積包括從100μl到20ml，截留分子量也涵蓋了2KDa到0.2um。

其實已經有很多前輩用Vivaspin超濾管收集外泌體了，參考文獻：

【1】Robert Gastpar, Mathias Gehrmann,Maria A. Bausero,Heat Shock Protein 70 Surface-Positive Tumor Exosomes Stimulate Migratory and Cytolytic Activity of Natural Killer Cells, Cancer Res 2005; 65: (12). June 15, 2005, 5238-5247

【2】M. Lucrecia Alvarez, Mahdieh Khosroheidari, Rupesh Kanchi Ravi and Johanna K. DiStefano, Comparison of protein, microRNA, and mRNA yields using different methods of urinary exosome isolation for the discovery of kidney disease biomarkers, Kidney International (2012) 82, 1024–1032; doi:10.1038/ki.2012.256; published online 11 July 2012