1.定義:連接酶鏈反應(Ligase chain reaction,LCR),是一種新的DNA體外擴增和檢測技術,主要用于點突變的研究及靶基因的擴增。
2.LCR的基本原理:利用DNA連接酶.特異地將雙鏈DNA 片段連接,經變性-退火-連接三步驟反復循環,從而使靶基因序列大量擴增。其程序為:在模DNA、DNA連接酶、寡核苷酸引物以及相應的反應條件下,首先加熱至一定溫度下(94——95℃)使DNA變性,雙鏈打開,然后降溫退火(65℃),引物與之互補的模板DNA結合并留下一缺口,如果與靶序列雜交的相鄰的寡核苷酸引物與靶序列完全互補,DNA連接酶即可連接封閉這一缺口,則LCR反應的三步驟(變性-退火-連接)就能反復進行,每次連接反應的產物又可在下一輪反應中作模板,使更多的寡核苷酸被連接與擴增。若連接處的靶序列有點突變,引物不能與靶序列精確結合,缺口附近核苷酸的空間結構發生變化,連接反應不能進行,也就不能形成連接產物。
3.應用范圍:主要用點突變的研究與檢測、微生物病原體的檢測及定向誘變等,還可用于單堿基遺傳病多態性及單堿基遺傳病的產物診斷,微生物的種型鑒定,癌基因的點突變研究等。