試劑、試劑盒 磷酸鹽緩沖液Affi-Gel 10 磷酸鈉(50 mmul L)乙醇胺
實驗步驟
材料
磷酸鹽緩沖液(50 mmol/L;PH7.5~8,0)
Affi-Gel 10(Bio-Rad Laboratories)
磷酸鈉(50 mmul/L),含 NaCl(1mol/L)(PBS)
乙醇胺(100 mmol/L)
操作程序
1) 用 50 mml/L 磷酸緩沖液(pH7.5~8.0) 配制 1~10 mg/ml 的蛋白質(配體) 溶液。此蛋白制備液必須不含其他氨基化合物。因此. 不應用 Tris 緩沖液或含銨鹽的緩沖液。可用的緩沖液有磷酸緩沖液、MES、MOPS 和 HEPES 等。如果蛋白制備液含有其他氨基化合物,可用 0.5mol/L 磷酸緩沖液(pH7.5~8.0) 將其透析掉。留取少量蛋白樣品,供測定偶聯效率用。
2)Affi-Gel 10 膠是以異丙醇懸液供應的。使用時必須將異丙醉去掉,以免引起配體蛋白失活。將 Affi-Gel 10 懸液傾入一燒結玻板漏斗。4°C 下,用去離子水快速洗膠數次。不要讓膠干了。如膠干掉,陷入微球內部的氣泡會使某些連接位點(linking site) 失效。