一、 相關理論
1、 血清（漿）蛋白質是血清（漿）固體成分中含量最多、組成復雜、功能廣泛的一類化和物。
2、 血清（漿）蛋白質的分類：
目前已研究的有300 余種，已分離提純的有100 余種，大部分在肝臟合成。
1） 鹽析法可將血漿蛋白分為白蛋白（Albumin, Alb 或
A）和球蛋白（Globulin, G）2 種
2） 醋酸纖維素薄膜電泳可將血清蛋白分為白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5 種
3） 瓊脂糖凝膠電泳可分為13 種
4） 聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）可分為30 多種
5） SDS-PAGE 可分為300 多種。
3、 血清（漿）蛋白質的功能：
1） 維持血漿滲透壓 2）運輸作用
3） 營養作用 4）緩沖作用
5）免疫作用 6）凝血作用
7）催化作用
4、 測定蛋白質含量的意義：
1） 實驗室測定蛋白濃度可推測蛋白質的總量和純度
2） 農牧業、食品加工業和發酵工業蛋白質定量分析也是一種重要手段
3） 在醫學領域，人體體液中總蛋白質和某些特定蛋白質的測定，可作為疾病診斷治療和病程觀察的重要指標
二、 常用測定方法（總蛋白）
1、 凱氏（Kjeldahl）微量定氮法：
1） 原理：在生物樣品中，蛋白質含氮量相對恒定，為16%，即1 克氮相當于6.25 克蛋白質，由于其它非蛋
白質含氮化合物所占的氮量甚微，故可通過測定樣品中的含氮量來推算其蛋白質含量。
2） 特點：歷史悠久（1883 年），結果較準，但方法復雜、費時。一般不用于常規檢測。
2、 雙縮脲法：
1） 原理：利用蛋白質肽鍵在堿性溶液中與Cu++作用產生紫紅色絡合物（雙縮脲反應），在一定范圍內，顏色反應強度與蛋白質含量成正比。
2） 特點：簡單、精密、準確（干擾因素較少），為首選方法，但靈敏度稍差（最低測定值 100ug）。
3、 酚試劑法：
1） 原理：Folin 1921 年首創，利用蛋白質分子中酪氨酸和色氨酸殘基（酚基）還原酚試劑（磷鎢酸-磷鉬酸）起藍色反應。1951 年，Lowry 對此法進行了改進，先于標本中加堿性銅試劑，再與酚試劑反應，提高了靈敏度。
2） 特點：靈敏度高（最低測定值 1ug），但易受還原性物質的干擾。
4、 紫外分光光度法：
1） 原理：利用蛋白質分子中色氨酸、酪氨酸殘基在280nm 由吸收峰，進行比色測定。
2） 特點：靈敏度較高（最低測定值 10ug），操作簡單，但儀器價格昂貴，易受其它因素干擾（尿素、膽紅素），需將蛋白質分離純化后再測。
5、 染料結合法：
1） 原理：酸性情況下，帶正電的蛋白質與帶負電的染料（如考馬斯亮藍G-250）結合呈現一定的顏色。
2） 特點：靈敏度高（最低測定值 1ug），操作簡單，干擾因素較少但特異性不高。
三、 實驗：酚試劑（Lowry）法測血清（總）蛋白質含量
1、 目的及要求
1） 掌握酚試劑法測血清蛋白質的原理
2） 掌握制作標準曲線的方法
2、 原理
1） 堿性條件下，蛋白質（血清）+銅生成蛋白質-銅復合物
2） 蛋白質-銅復合物使磷鎢酸-磷鉬酸還原，生成藍色物質
3、 試劑（略）
4、 操作
1） 血清的稀釋（1:500）
2） 標準曲線的制備：按下表操作（單位：ml）
混勻，30min 后，以第1 管為空白管，在650nm 處比色，讀取各管光密度，并以其為縱坐標，各管蛋白質濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
5、 計算
1） 以A 測讀數查標準曲線求得血清蛋白質含量
2） 以第6 管為標準管，計算：
6、 注意事項
1） 加入酚試劑時動作要快并立即搖勻，不應出現混濁
2） 標準曲線制備：3、5、7 管平行，各管A 之差不得超過0.005，否則刪去，取平均值；最好呈45o 直線。
7、 臨床意義
1） 總蛋白增加：血液濃縮（嚴重腹瀉、嘔吐、高熱、休克）；合成增多（多發性骨髓瘤G）
2） 總蛋白減少