酯酶是分解各種酯類的水解酶，根據機制的不同，分為非特異性酯酶和特異性酯酶，非特異性酯酶易水解像acetate和butyrate之類具有短鏈的酯類，特異性酯酶易水解像naphthol
AS‐D
cholroaceteta之類的具有長鏈的酯類。單核‐巨噬細胞類為非特異性酯酶反應染色，中性粒細胞類則為特異性酯酶反應染色，因此在判別單核細胞類或中性粒細胞類時非常有用，特別是二重染色法非常重要。
酯酶染色的方法較多，常根據其作用液的pH和底物的不同將常用的酯酶染色法分為二類：①特異性酯酶（specific
esterase）染色法，如氯乙酸AS‐D萘酚酯酶（naphthol AS‐D chloroacetate
es‐terase）染色法；②非特異性酯酶（nonspecific
esterase，NSE）染色法，常用α‐乙酸萘酚酯酶和α‐丁酸萘酚酯酶染色法。
1﹒氯乙酸AS‐D 萘酚酯酶染色
【原理】
血細胞內的氯乙酸AS‐D萘酚酯酶（naphythol
AS‐D chloroacetate
esterase，NAS‐DCE）水解基質液中的氯乙酸AS‐D萘酚，產生AS‐D萘酚，進而與基質液中的重氮鹽偶聯形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質內酶所在的部位。本試驗常用的重氮鹽為堅牢紫醬GBC，形成的有色沉淀為紅色。NAS‐DCE幾乎僅出現在粒細胞，其特異性高，因此又稱為“粒細胞酯酶”、“特異性酯酶”。
【正常血細胞的染色反應】
（1）粒細胞系：分化差的原粒細胞呈陰性反應，分化好的原粒細胞呈陽性反應，從早幼粒細胞到成熟中性粒細胞均呈陽性反應，但酶活性并不隨著細胞的成熟而增強。嗜酸性粒細胞呈陰性或弱陽性，嗜堿性粒細胞呈陽性。
（2）單核細胞系：絕大多數為陰性反應，但有個別單核細胞系統的細胞也呈弱陽性反應。
（3）肥大細胞陽性。
（4）其他細胞：如淋巴細胞、漿細胞、巨核細胞、幼紅細胞、血小板等均呈陰性反應。
【臨床意義】
主要用于輔助鑒別急性白血病的細胞類型。
（1）急性粒細胞白血病：原粒細胞呈陽性或陰性。
（2）急性早幼粒細胞白血病：顆粒異常增多的早幼粒細胞呈強陽性。
（3）急性單核細胞白血病：原單及幼單細胞幾乎均呈陰性，個別細胞呈弱陽性。
（4）急性粒‐單細胞白血病：原粒及早幼粒細胞呈陽性，原單及幼單細胞呈陰性。
（5）急性淋巴細胞白血病和急性巨核細胞白血病：均呈陰性。
2﹒α‐醋酸萘酚酯酶染色
【原理】
血細胞內的α‐醋酸萘酚酯酶（α‐naphythyol
acetate
esterase，α‐NAE）在pH中性的條件下水解基質液中的α‐醋酸萘酚，釋放出α‐萘酚，進而與基質液中的重氮鹽偶聯形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質內酶所在的部位。本試驗常用的重氮鹽為堅牢藍B，形成的有色沉淀為棕黑色或灰黑色，α‐NAE存在于單核細胞、粒細胞和淋巴細胞中，故它是一種中性非特異性酯酶。單核細胞的陽性可被氟化鈉抑制，所以做α‐NAE染色時，通常同時做氟化鈉抑制試驗。
【正常血細胞的染色反應】
（1）單核細胞系：分化差的原單細胞呈陰性，分化好的原單細胞呈陽性（常較強），幼稚及成熟的單核細胞也呈陽性，單核系細胞的陽性反應能被氟化鈉抑制。所謂抑制是指氟化鈉試驗的抑制率大于50%，抑制率的計算公式為：
（2）粒細胞系：各期粒細胞大多呈陰性反應，僅少數粒細胞呈弱陽性反應，且陽性反應不能被氟化鈉抑制。
（3）淋巴細胞系：各期淋巴細胞多數陰性反應，少數呈弱陽性反應，且陽性反應不能被氟化鈉抑制。
（4）其他細胞：巨核細胞和血小板呈陽性反應，陽性反應不能被氟化鈉抑制；幼紅細胞大多數呈陰性反應，少數呈弱陽性反應，陽性反應不能被氟化鈉抑制；漿細胞呈陰性反應。
【臨床意義】
主要用于輔助鑒別急性白血病的細胞類型。
（1）急性單核細胞白血病：單核系細胞大多數呈陽性，陽性反應能被氟化鈉抑制。
（2）急性粒細胞白血病：原粒細胞呈陰性或陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制。
（3）急性早幼粒細胞白血病：早幼粒細胞呈強陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制。
（4）急性淋巴細胞白血病：原始及幼稚淋巴細胞呈陰性或陽性反應，陽性反應不能被氟化鈉抑制。
（5）急性粒‐單核細胞白血病：原粒細胞呈陰性至陽性反應，陽性反應不被氟化鈉抑制；原始及幼稚單核細胞呈陽性，單核細胞陽性反應能被氟化鈉抑制。
（6）紅血病和紅白血病：異常幼紅細胞可呈陽性反應，陽性反應不能被氟化鈉抑制。
3﹒醋酸AS‐D 萘酚酯酶染色
【原理】
血細胞內的醋酸AS‐D萘酚酯酶（naphythyol
AS‐D acetate
esterase，NAS‐DAE）在pH中性的條件下水解基質液醋酸AS‐D萘酚，釋放出AS‐D萘酚，進而與基質液中的重氮鹽偶聯形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質內酶所在的部位。本試驗常用的重氮鹽為堅牢藍BB，形成的有色沉淀為藍色，α‐NAE存在于單核細胞、粒細胞和淋巴細胞中，故它是一種中性非特異性酯酶。單核細胞的陽性可被氟化鈉抑制，所以做NAS‐DAE染色時，通常同時做氟化鈉抑制試驗。
【正常血細胞的染色反應】
（1）粒細胞系：原粒細胞呈陰性或陽性反應，早幼粒細胞至成熟中性粒細胞均為陽性反應，一般為（＋）～（＋＋），此反應不被氟化鈉抑制。
（2）單核細胞系：原單核細胞呈陰性或陽性反應，幼單核細胞和單核細胞均呈陽性反應，一般為（＋＋）～（＋＋＋），此反應能被氟化鈉抑制。
（3）淋巴細胞系：淋巴細胞呈陰性或弱陽性反應，此反應不被氟化抑制。
（4）紅細胞系：早期幼紅細胞可呈陽性反應，隨著細胞的成熟陽性反應程度逐漸減弱，此反應不被氟化鈉抑制。
（5）巨核細胞系：巨核細胞和血小板均呈陽性反應。
【臨床意義】
臨床意義基本同α‐NAE染色，用以輔助鑒別急性白血病的細胞類型。
4﹒α‐丁酸萘酚酯酶染色
【原理】
血細胞內的α‐丁酸萘酚酯酶（α‐naphythyol
butyrate
esterase，α‐NBE）在pH堿性的條件下水解基質液中的α‐丁酸萘酚，釋放出α‐萘酚，后者與基質液中的重氮鹽偶聯形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質內酶所在的部位。本試驗常用的重氮鹽為堅牢紫醬GBC，形成的有色沉淀為紅色。α‐NBE主要存在于單核細胞中，其陽性產物能被氟化鈉抑制，而其他細胞系列的陽性產物不能被氟化鈉抑制。
【正常血細胞的染色反應】
（1）粒細胞系：各期粒細胞均呈陰性。
（2）單核細胞系：分化差的原單細胞呈陰性反應，分化好的原單細胞呈陽性反應，幼稚及成熟的單核細胞呈陽性反應，陽性反應能被氟化鈉抑制。
（3）淋巴細胞系：外周血的T淋巴細胞、非T非B 淋巴細胞可呈陽性反應，B 淋巴細胞呈陰性反應。
（4）其他細胞：巨核細胞、幼紅細胞、漿細胞呈陰性或弱陽性反應；組織細胞也可呈陽性反應，但不被氟化鈉抑制。
【臨床意義】
與α‐NBE染色的臨床意義相同，主要也是用于輔助鑒別急性白血病的細胞類型。但敏感性不如α‐NAE，而特異性較α‐NAE高，所以α‐NBE染色也是急性白血病常用的細胞化學染色。
5﹒酸性α‐醋酸萘酚酯酶染色
【原理】
血細胞中的酸性α‐醋酸萘酚酯酶（acid α‐naphythyol acetate esterase，ANAE）在pH弱酸性（pH 5.8）的條件下，水解基質液中的α‐醋酸萘酚，產生α‐萘酚，萘酚在與六偶氮副品紅形成紅色沉淀，定位于胞質中酶活性處。
【正常血細胞的染色反應】
（1）淋巴細胞系：T淋巴細胞陽性，B淋巴細胞多數為陰性反應。
（2）單核細胞系：單核細胞常呈強陽性反應。
（3）其他細胞：粒系細胞、紅系細胞、巨核系細胞含量較少。
【臨床意義】
（1）有助于鑒別T、B淋巴細胞：成熟T淋巴細胞呈點狀顆粒或塊狀陽性，B 淋巴細胞大多呈陰性反應，偶見稀疏、彌散的細小顆粒。
（2）有助于鑒別急性白血病的類型：急性T淋巴細胞白血病常呈點狀或塊狀陽性，急性粒細胞白血病常呈陰性或弱陽性，急性顆粒異常增多的早幼粒細胞白血病呈陽性較強（呈彌散分布），急性單核細胞白血病呈強陽性（呈彌散分布）。
ANAE染色在臨床上主要用于鑒別T、B淋巴細胞，而目前淋巴細胞白血病的分類常以熒光染色用流式細胞儀分類，該方法更準確，所以ANAE染色應用較少。
6﹒酯酶雙染色
在同一張涂片上進行兩種酯酶染色的方法稱為酯酶雙染色。多數采用一種特異性酯酶加一種非特異性酯酶染色，故常用的有α‐醋酸萘酚酯酶與氯乙酸AS‐D萘酚酯酶雙染色、α‐丁酸萘酚酯酶與氯乙酸AS‐D萘酚酯酶雙染色等。反應的原理基本上同各自的染色原理，但同一張涂片上的血細胞要分別在兩種不同的基質液中作用一定時間，最后復染、顯微鏡觀察。酯酶雙染色對診斷急性粒‐單核細胞白血病的診斷具有獨特的價值，即在同一張片中出現兩種酯酶染色陽性細胞或同一種細胞同時出現兩種酯酯染色陽性結果。