酵母β-葡聚糖含量化學比色法定量檢測試劑盒產品使用說明
主要用途
YIJI 酵母β-葡聚糖含量化學比色法定量檢測試劑是一種旨在通過染料剛果紅與β-D-葡聚糖結合沉淀，產生吸光峰值的變化，來測定樣品中β-葡聚糖濃度的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種培養酵母菌種β-葡聚糖的含量檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。
技術背景
β-D-葡聚糖（β-D-glucan）是一種葡萄糖單體通過β-1,3或β-1,4主鏈和β-1,6側鏈上的糖苷鍵（glycosidic bond）鏈接而成的多聚體葡萄糖分子，普遍存在于植物中纖維素（cellulose）、谷粒外皮、以及藻類、真菌、酵母、蘑菇或細菌的胞壁等。其中β-1,3-D葡聚糖更為常見，具有生物活性和藥物特性，包括免疫刺激、抗炎、抗菌、抗傳染、抗癌、降低膽固醇、放射線的保護及傷口愈合等活性。β-D-葡聚糖的測定包括苯酚-硫酸法、剛果紅法、苯胺藍法和酶連續反應法等，其中剛果紅法作為比色定量技術，操作非常方便。基于β-D-葡聚糖，與剛果紅（Congo red；benzidinediazo-bis-1-naphthylamine-4-sulfonic acid）反應產生沉淀復合物，呈現吸光峰值的降低（波長540nm），由此定量測定β- D-葡聚糖的含量。
產品內容
YIJI 萃取液（Reagent A） 毫升
YIJI 稀釋液（Reagent B） 毫升
YIJI 反應液（Reagent C） 毫升
YIJI 標準液（Reagent D） 毫升
產品說明書 1份
保存方式
保存 YIJI 標準液（Reagent D）在－20℃冰箱里；其余的保存在4冰箱里；YIJI反應液（Reagent C）避免光照；有效保證6月
用戶自備
15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管：用于標準液配制或反應的容器
（微型）臺式離心機：用于樣品操作
電爐：用于煮沸孵育
比色皿或酶標板：用于染色后比色檢測的容器
分光光度儀或酶標儀：用于比色分析
實驗步驟
樣品準備
準備好5毫升待測的新鮮酵母細胞（OD600＝1.0，即1 X 108細胞/毫升）
移入到15毫升錐形離心管
放進4℃臺式離心機離心5分鐘，速度為1000g
小心抽去上清液
加入xx毫升YIJI 萃取液（Reagent A）
渦旋震蕩15秒
煮沸水浴里孵育5分鐘
渦旋震蕩15秒
加入xx毫升YIJI 萃取液（Reagent A）
渦旋震蕩15秒
放進臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g
小心抽去上清液
加入xx毫升YIJI 萃取液（Reagent A）
渦旋震蕩15秒
放進臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g
小心抽去上清液
加入xx毫升YIJI 稀釋液（Reagent B），混勻
置于冰槽里備用
測定準備
準備好待測樣品，置于冰槽里
設定好分光光度儀或酶標儀（溫度為25℃）：波長540nm，并置零
準備好5個1.5毫升離心管，標記為1至5號管
按照下表配制標準液
將1至5號管置于室溫下備用；標準管濃度見下表
|
管號 |
YIJI 稀釋液（Reagent B） |
YIJI 標準液（Reagent D） |
標準葡聚糖含量 |
|
1 |
―― |
xx微升 |
xx微克 |
|
2 |
xx微升 |
xx微升1號管 |
xx微克 |
|
3 |
xx微升 |
xx微升2號管 |
xx微克 |
|
4 |
xx微升 |
xx微升3號管 |
xx微克 |
|
5 |
xx微升 |
0 |
0 |
標準曲線測定
加入500微升上述配制的標準液到1.5毫升離心管
加入xx微升YIJI 反應液（Reagent C）
渦旋震蕩15秒
放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
小心移取上清液到比色皿或酶標板
即刻放進分光光度儀檢測：獲得相對吸光讀數
重復實驗步驟1至6四次
構建標準曲線：縱座標（Y軸）為相對吸光單位；橫座標（X軸）為標準葡聚糖含量（微克）
樣品測定
加入500微升上述制備的待測樣品到1.5毫升離心管
加入xx微升YIJI 反應液（Reagent C）
渦旋震蕩15秒
放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
小心移取上清液到比色皿或酶標板
即刻放進分光光度儀檢測：獲得相對吸光讀數
根據標準曲線獲得樣品對應葡聚糖含量
計算樣品濃度
注意事項
本產品為25次操作，包括標準樣
本產品檢測范圍是100至300微克葡聚糖
操作時，須戴手套
比色測定后，比色皿須清洗徹底
如果待測樣品濃度過高或過低，可以調整樣品濃度
本公司提供系列葡聚糖檢測相關試劑產品