酵母實驗操作方案（2)

附錄一 培養基

LB：
Tryptone 10g 1%
Yeast Extract 5g 0.5%
NaCl 5g 0.5%
【Agar】 15g 1.5%（固體培養基另加）
dH₂O稀釋至1L，高壓滅菌
YPD：
Yeast Extract 10g 1%
Peptone 20g 2%
【Arga】 20g 2％（固體培養基另加）
dH₂O 900ml 高壓滅菌，冷卻至60度，加
10×Dextrose 100ml
YPD－G418：
250ml YPD加10×Dextrose后加適量G418，注意輕搖混勻，不要產生氣泡，同時留空白對照板。

MD：
YNB 3.4g 0.34%
【Sorbitol】 182.2g 1M
【Agar】 15--20g 1.5%-2%
dH₂O 800ml
高壓滅菌，冷卻至60度，加
10×(NH₄)₂SO₄ 100ml 1%
500×biotin 2ml 4×10^－5％
10×Dextrose 100ml 1％
MGY：
YNB 3.4g 0.34%
dH₂O 800ml
高壓滅菌，冷卻至60度，加
10×(NH₄)₂SO₄ 100ml 1%
10×Glycerol 100ml 1%
500×biotin 2ml 4×10^－5％
BMMY：
Yeast Extract 10g 1%
Peptone 20g 2%
YNB 3.4g 0.34%
K2HPO4 3.013g
KH2PO4 11.813g (PH6.0 緩沖液)
dH₂O 900ml
高壓滅菌，冷卻至60度，加
10×(NH₄)₂SO₄ 100ml 1%
每次使用之前，分裝后加2/1000體積
500×biotin 2ml 4×10^－5％
連接產物的質粒轉化
1）－70⁰C取出Top10感受態細胞，50ul/管，取出后迅速分裝城10ul或20ul/管；
2）冰浴30min；
3）42⁰C，30秒（精確計時），置于冰水1－2min；
4）加等體積37⁰C預熱的SOC培養基；
5）37⁰C，225rpm，培養45min；
6）100ul分別涂板，37⁰C培養；