基本方案
| 實驗方法原理 | 酵母細胞的裂解方法有很多種，包括自溶、壓力破碎（如French加壓罐）、研磨（玻璃珠振蕩）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案討論的振蕩玻璃珠研磨，是最簡便的方法之一。這對于小體積（如＜1mL的）和數升體積都很有效。經相差顯微鏡檢測，細胞破碎率一般＞95%。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 新鮮培養的酵母細胞 |
| 試劑、試劑盒 | 裂解緩沖液（RIPA緩沖液） PBS |
| 儀器、耗材 | 預冷的玻璃珠 |
| 實驗步驟 |
①在微型離心機上離心3mm，以收集細胞。 ②去上清，用PBS重懸細胞，再離心3min。 ③去上清，估算細胞沉淀的體積，向細胞沉淀中加人3倍體積的冰浴裂解緩沖 液，懸浮后置于冰上。 ④加入等體積的預冷玻璃珠。 ⑤劇烈振蕩懸浮液30s。 ⑥重復步驟⑤，并在相差顯微鏡下觀察，直到大部分酵母細胞被裂解。 ⑦4℃條件下在小型離心機中離心懸浮液5min， ⑧小心地倒出上清，并轉移到另一管中，置于冰上備用。
展開 |
| 注意事項 |
器材預處理：將玻璃珠在1mol/L的HCl中洗兩遍，然后在裂解緩沖液中洗兩遍。將洗過的玻璃珠液泡于4℃條件下儲存在少量的裂解緩沖液中。 |
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