在非選擇性生長條件下，大多數大腸桿菌/酵母菌穿梭載體的丟失頻率大約1%，采用本方案不易分離除去的一個質粒是內源性2 μm 質粒，2 μm DNA自發丟失的頻率約為每代10-4。
| 實驗材料 | |
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| 試劑、試劑盒 | |
| 儀器、耗材 | |
| 實驗步驟 | 1. 挑取幾個含質粒的酵母宿主菌菌落，接種于10 ml 非選擇性培養基，于30℃培養過夜。
2. 在非選擇性平板上于30℃培養2天以得到單菌落，大多數情況下，可以得到約200~300個單菌落（約每平板100個菌落）。
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| 注意事項 | 如果沒有其他的選擇，可以用YPD培養基，如果要保留其他不穩定遺傳標志或質粒，可以用添加了與可能丟失的選擇標志相應的營養成分的確定成分培養基。 |