酵母DNA的快速分離

實驗方法原理 根據該方案制備的酵母 DNA 可以用作 PCR 反應的模板。在 E. coli 和 Saccharomyces cerevisiae 中均能復制的穿梭質粒也可以從酵母中提取，并且可以用于轉化 E. coli。

實驗材料 酵母細胞

試劑、試劑盒 乙醇酚氯仿醋酸鈉STES 緩沖液TE

儀器、耗材 酸洗過的玻璃珠

實驗步驟

一、材料

1. 緩沖液及溶液

乙醇

酚：氯仿（1:1, V/V)

醋酸鈉（3 mol/L, pH 5.2）

STES 緩沖液（0.2 mol/L Tris-Cl (pH 7.6)，0.5 mol/L NaCl，0.1% (m/V) SDS，0.01 mol/L EDTA，室溫保存）

TE ( pH 7.6)

2. 專用設備

酸洗過的玻璃珠（0.4 mm)

3. 細胞和組織

新鮮的瓊脂平板培養的克隆或液體的過夜培養的酵母細胞

二、方法

1. 準備用于裂解的酵母細胞。

(1) 平板培養的酵母克隆

使用無菌的接種環將一個或幾個大的、新鮮培養的克隆轉移到加有 50 μl STES 緩沖液的微量離心管中。

(2) 液體培養的酵母

① 將 1.5 ml 過夜培養的酵母細胞轉移到微量離心管中。

② 用最大轉速室溫下離心 1 min, 收集沉淀下來的細胞。

③ 吸去培養介質，將細胞重懸于 50 μl STES 緩沖液中。

2. 向酵母懸濁液中加入 50 μl 酸洗過的玻璃珠。每管加入 20 μl TE ( pH 7.6)。

3. 加入 60 μl 酚: 氯仿。蓋上蓋子，振蕩 1 min, 使有機相和水相充分混合。

4. 用最大轉速室溫下離心 5 min。

5. 將上層水相轉移到一個新的離心管中。0℃ 下用乙醇沉淀 15 min。

6. 用最大轉速 4℃ 下離心 10 min, 收集核酸沉淀。

7. 吸去上清，用 100 μl 水配制的 70% 乙醇洗滌沉淀。用最大轉速室溫下離心 1 min。

8. 吸去上清。空氣中干燥 DNA 沉淀 15 min。將沉淀溶于 40 μl TE（pH 7.6）。