酶標儀讀數原理

在試劑盒操作的最后一個步驟即是利用酶標儀對實驗結果進行數字化，也就是常說的“讀板檢測OD值”，檢測單位用OD值表示， OD是optical density（光密度）的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度， OD＝1og（1／trans），其中trans為檢測物的透光值。根據Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強度成下述關系：E＝OD = logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度， Ι0 為在檢測物之前的光強度，Ι為從被檢測物出來的光強度。OD值由下述公式計算：E＝OD=C×D×E，C為檢測物的濃度，D為檢測物的厚度，E為摩爾因子。做ELISA實驗都是利用的專門儀器（酶標儀）進行測量的，酶標儀的前身是常見的分光光度計，它主要是利用濃度有差異的物質對同一種光的吸收率不一樣，而分辨后進行數字化顯示的裝置。分辨酶標儀的優劣最主要的參數是最大檢測值和儀器變異度。光是電磁波，波長100nm～400nm稱為紫外光， 400nm～780nm之間的光可被人眼觀察到，大子780nm稱為紅外光。人們只所以能夠看到色彩，是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色，是因為植物吸收了光中的紅色光譜。酶標儀測定的原理是在特定波長下，檢測被測物的吸光值。
五、雙波長檢測的原理：在特定波長下測定每一種物質都有其特定的波長，在此波長下，此物質能夠吸收最多的光能量。如果選擇其它的波長段，就會造成檢測結果的不準確。因此，在測定檢測物時，我們選擇特定的波長進行檢測，稱為測量波長。一般來說在ELISA操作中出現的黃顏色溶液，在450nm波長下會有最大的吸收值。但是每一種物質對光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們再選取一個參照波長，以消除這個不準確性。在參照波長下，檢測物光的吸收最小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。在ELISA酶標儀中一般采用最大波長作為參照波長，以消除非特異性吸收以及底部的指紋等其他干擾。所以在做現代ELISA實驗時，最好能選擇雙波長進行讀數，可最大限度的消除指紋、雜質及不透光的物質對酶標儀讀數帶來的誤差，以保證實驗數據的準確性。
六、酶標儀的檢測原理：光是電磁波，波長100nm～400nm稱為紫外光， 400nm～780nm之間的光可被人眼觀察到，大于780nm稱為紅外光。人們只所以能夠看到色彩，是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色，是因為植物吸收了光中的紅色光譜。酶標儀測定的原理是在特定波長下，檢測被測物的吸光值。 
　　檢測單位： 
　　光通過被檢測物，前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量，特定波長下，同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關系。 
　　檢測單位用OD值表示， OD是optical delnsity（光密度）的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度， OD＝1og（1／trans），其中trans為檢測物的透光值。根據Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強度成下述關系： 
E＝OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度， Ι0 為在檢測物之前的光強度，Ι為從被檢測物出來的光強度。 
　　OD值由下述公式計算： 
　　E＝OD=C×D×E 
　　C為檢測物的濃度 
　　D為檢測物的厚度 
　　E為摩爾因子 
　　在特定波長下測定每一種物質都有其特定的波長，在此波長下，此物質能夠吸收最多的光能量。如果選擇其它的波長段，就會造成檢測結果的不準確。因此，在測定檢測物時，我們選擇特定的波長進行檢測，稱為測量波長。 
　　但是每一種物質對光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們再選取一個參照波長，以消除這個不準確性。在參照波長下，檢測物光的吸收最小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。 
　　Anthos 酶標儀檢測值計算 
　　儀器中的檢測器接收透過被檢測物的光能量，轉換成二進位數字信號，最大為4095。儀器定義沒有光源下的透光值為 0％，沒有檢測物的透光值為100％。則實際檢測中，檢測物的透光值均在 0％一100％之間。透光值 
的計算如下： 
　　T＝（Meas—Min）／（Max—Min） 
　　其中T為透光值， Meas為檢測的二進位數值， Min為在 0％的情況下檢測的二進位數值， Max為在100％的情況下檢測的二進位數值，舉例如下： 
　　MaX=3600 Mn=20 Meas＝30 
　　T=（30-20）/3600-20)＝0．0028 
　　OD＝1og（1/T）=1og（1/0.0028）=2.552 
　　Anthos 酶標儀的中心定位 
　　儀器會自動對酶標孔進行中心定位，中心定位是要消除酶標孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準確。在對每一個酶標儀進行檢測時，儀器其實要進行35個點的測量，選取最中間的5個點的均值為本孔的OD值。 
　　光源的參照通道 
　　參照通道是用來校準由于電壓不穩或燈泡磨損帶來的影響。 
　　酶標儀的用途和其它提示 
　　用于ELISA試劑的測定，廣泛用于各種實驗室，包括臨床實驗室。 
　　質量控制 
　　質量控制是試劑檢測的重要因素。請按照試劑說明書的要求進行質量控制。 
　　空白校正 
　　有一些試劑盒的說陰書將空白孔設置為空氣，其它大多數空白孔的設置是用試劑來設置的，請按照試劑盒的說明書要求進行。 
　　檢測結果的解釋 
　　由于有相當多的因素會影響檢測的結果，如不同的酶標板，檢測試劑的體積，都會造成OD值的不，因此，只有使用同一酶標板反應的試劑檢測結果才能比較和分析。對結果的臨床解釋請依照試劑盒的說明書進行。