酶標儀軟件操作步驟

一.       軟件運行前的連接

酶標儀插上電源，和電腦連接好后，打開電腦和酶標儀開關，酶標儀至少穩定15min后開始讀數，效果比較好。注意，當酶標儀處于power on 的狀態時，不要手動打開酶標板室和比色皿室的門，以免紫外輻射的傷害或者儀器的損傷。

二．軟件的運行

1.打開桌面快捷方式SkanIt RE for MSS 2.4.2運行軟件，出現Log on To SkanIt software的界面。

2.use name默認為“admin”, password為空

3.點OK進入SkanIt software 2.4.2界面，New session-新建任務程序，Open session-打開已有程序。

4.在界面上方的setting中選擇Instrument，出現Instrument setting的界面，在Instrument中選中Multiskan spectrum on COMⅠ,Themo Electron。點擊右側的setup，在serial number中輸入1500-850，然后點擊OK。再點擊Default instrument右邊的connect，即可設定好連接。然后點擊close關閉窗口。

三．New session操作

1．新建任務程序：

→點擊new session進入protocol options界面，在session name中輸入新的程序名稱

→點擊next進入plate layout options界面，在select plate template中選擇所需模板類型（一般96孔板選擇use default，比色皿選擇cuvette，其他的可以選擇相應的類型）

→輸入plate layout name(系統默認的與session name相同)

→點擊next進入Definition done界面，在select location中選擇任務程序所要保存的目的文件夾（該界面可進行新建，重命名及刪除文件夾操作）

→點擊finish完成新建，進入SkanIt software 2.4.2程序操作主界面（主要有三大塊： platelayout用于模板區域選擇，protocol用于程序編輯，results用于數據處理）。

2.plate layout對模板區域進行選取

→點擊wizard進入選取模板區域操作界面fill wizard（任務類型type有： blank空白，calibrator標準蛋白，control對照，empty空白，unkown一般為樣品）。                  

→在右邊模板中選取開始點位置，即紅圓點所在位置。

→選取方向，在Filling order中可通過箭頭設定。

→對于blank，在No.of replicates中填寫好重復數，選擇好開始位點和方向，點擊Add可完成。

→對于calibrator，在No.of calibrators 中填寫標準蛋白的個數，在No.of replicates中填寫好重復數，選擇好開始位點和方向。如有濃度梯度，可選擇Generate series進行設置。

例如，取7個濃度蛋白做標準曲線，稀釋倍數分別為20，40，80，160，320，640，1320，每個濃度重復兩次，則在No.of calibrators 中填寫7，在No.of replicates中填寫2，選擇好選擇好開始位點和方向。然后選中Generate series，出現conventions的界面，在Initial value中填寫20，在operators中選擇Multiply，step by中填寫2，點擊ok。

→對于control，操作基本和calibrators相似。

→對于Empty操作基本和blank相似。

→對于unknown，填寫好No.of replicates，No.of unknowns并選擇好開始位點和方向，點擊Add即可完成。

→第一塊板填滿后，有時會自動進入第二塊板的編輯，注意看Fill wizard的模板下方的current plate，如果顯示為2/2,則可以直接關掉窗口，模板區域即可編好。

標注：對于單一型任務可先選取全模板【即在No.of unkown選項中設為模板最大孔數】，然后對不要的區域進行刪除。

對于非blank和empty型任務，若有濃度差，可勾選generate series,然后進行設定：series為有規則的濃度差，multiple values為不規則的濃度差。有規則的可通過運算公式，系統直接算出，無規則的通過鍵盤輸入，點擊add進行添加。

3.編輯程序

→選好所用模板區域后，點擊protocol進入程序編輯界面。

→在protocol properties所屬框內的execution order選項中選中數據讀取路徑（共有四種，第一種一般為常用路徑，一次讀四個孔）。

→在Settle delay選項中設定讀數時間間隔。一般比色皿不需要讀書時間間隔，設置為零即可，對于測量板而言，由于板在移動過程中液體表面共振波的影響，需要穩定一段時間，一般設置為5s in a 6-well plate，300ms in a 96-well plate，<20ms in a 384-well plate。

→在steps所屬框內空白處或選中程序單擊鼠標右鍵得到應用程序子菜單。

→在子菜單中選取你所要運行的程序（如常用的程序有photometric,photometric-scanning,Incubate和shake等），并在該程序的選項中設定你所需的參數。一般測蛋白含量選擇photometric，在wavelength中設置好波長即可。

→所有程序編寫好后，在session中點擊save保存好模板程序，不保存將無法運行上面所設的模板程序。

4．測讀數據

→在Execution所屬框內點擊connect鏈接機器，鏈接過程中會出現機器狀態列表窗口，無異常后點Close關閉。

→在Execution所屬框內點擊run plate out彈出酶標板載板，把酶標板底部擦干后放上去后，確保平穩后點擊run plate in，等酶標板進去。

→在Execution所屬框內點擊Execute session按鈕運行所設程序，彈出Run name窗口，點擊Ok確認運行。接著會出現讀數窗口，不要關閉讀數窗口，讀數完畢后窗口會自動消失，并彈出酶標板載板。

注：以前，無法進行人工讀板，這是因為機器序列號的設置不對，要仔細查看機器上的機器序列號，將正確的序列號填入操作軟件中的設置中。

5．數據分析及保存

→儀器讀數完畢后，系統自動進入Results操作界面，在Result界面所屬框中，可對所得數據進行分析。

→在Result所屬框中，單擊要分析數據的程序，如測蛋白一般選擇的photometric，點鼠標右鍵得到數據分析方法主菜單。

→選擇要分析的方法，測蛋白選擇Quantitative Curve Fit，出現Parameters，Graph，Table，List可以點擊查看結果。

→如果需要標準曲線，則在Graph的曲線圖中單擊右鍵選擇Toolbar，圖標上方會出現一系列圖標，點擊Copy to clipboard選擇As a Bitmap，將其粘貼在新建word文檔中并保存。

→點擊Result左側圖標框中選擇Export，在Parameters中的select items to report中選擇要保存的內容，一般選擇layout，Photometric， Quantitative Curve Fit，然后點擊Add，在；右邊的Report items中出現所選擇的內容。

→在After execution中選中Save to file，通過右下方的Browse選擇要保存的文件。注意此次操作可能沒有保存到目的文件夾。必須進行以下步驟。

→點擊上方的Report可看見結果，點擊Save選擇所要保存到的目的文件夾。并檢查是否所有要保存的數據都已經保存到相應文件夾中。

三．Open session操作

 若要運行或查看已有的程序，在登錄界面點擊Open session,打開程序所在文件夾，單擊所要運行或查看的程序（提示：在該界面中，點NewFolder可新建文件夾,Rename可對已有文件夾重命名，delete可對程序及文件夾進行刪除），點Open打開。然后可進行所需操作。

四．儀器的斷開與關閉

在讀數完成后若要關閉儀器，應先在Execution所屬框內點擊Run plate in，待酶標板載板進去后，點擊disconnect斷開儀器，然后再關閉儀器開關，蓋好外罩。