酶組織化學對組織處理的基本要求

    根據組織化學酶檢出的基本步驟。主要有以下5方面影響酶活性：

    1．選擇zui適溫度、pH及緩沖液。

    2．固定和切片標本制作  由于固定液易使酶喪失酶活性，因此用不固定的冰凍切片顯示酶活性。切片厚度一般為8～12um，不超過40um，因為切片在60um以上時，浸透速度減慢，易出現人工假象。

    3．捕捉劑和激活劑  捕捉劑是形成zui終產物的基本條件，有Pb²⁺ 、Cu²⁺ 和Ba²⁺ 等，其中Pb²⁺ 廣泛應用于磷酸酶、酯酶和轉移酶等酶反應。凡能提高酶活性的物質，稱為激活劑。

    激活劑分為三大類：

    (1)離子：多為金屬離子。一種激活劑對某種酶能起激活作用，但是可能對另一種酶起抑制作用；有時離子間也有拮抗現象，如Na⁺ 抑制K⁺ 的激活作用，Ca²⁺ 抑制Mg²⁺ 的激活作用等。

    (2)小分子化合物：某些還原劑可提高酶活性，例如半胱氨酸和還原型谷胱甘肽等能使酶分子中的雙硫鍵還原成硫氫基。

    (3)激活酶：指可使某些無活性的酶原變為有活性的酶。

    4．抑制劑  指某些物質在不引起酶蛋白變性的情況下，使酶活性減弱，甚至使酶活性消失。

    5．對照實驗  為確定被檢酶是否具有特異性，以避免發生假陽性或假陰性結果，同時要進行對照實驗。酶的性質是指對其相應的底物發生作用。如果有兩種或更多酶作用于同一底物時，需要用以下方法進行酶反應特異性的對照實驗。

    (1)用酶的抑制劑確認酶活性的對照實驗。

    (2)除去底物對照實驗：用去底物的孵育液進行反應。確認反應消失或明顯減弱。

    (3)陽性對照實驗：用已確定有某種酶存在的組織細胞與待測組織同時進行反應，兩者相互對照，以確認酶活性的存在。