ELISA測定的標本十分廣泛,體液（如血清）,分泌物（唾液）和排泄物（如尿液,糞便）等。
均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份.有些標本可直接進行測定（如血清,尿液）,有些則需經預處理（如糞便和某些分泌物）。
大部分ELISA檢測均以血清為標本.血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清.制備血漿標本需借助于抗凝劑,而血清標本只要待血清自然凝固,血塊收縮后即可取得.除特殊情況外,在醫學檢驗中均以血清作為檢測標本.在ELISA中血漿和血清可同等應用.血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。