實驗概要
酸性磷酸酶能分解磷酸脂而釋放出磷酸基。在pH5.0的環境中,磷酸基能與鉛鹽反應形成磷酸鉛。但因其是無色的,所以再經過與硫化銨作用,形成棕黑色的硫化鉛沉淀,由此就能顯示酸性磷酸酶在細胞內的存在與分布。
主要試劑
10%中性福爾馬林(pH6.8~7.1)
酸性磷酸酶作用液
2%β—甘油磷酸鈉 4ml
1%硫化胺溶液
姬姆薩染液(1:30)
6%淀粉肉湯
實驗材料
小鼠腹腔液涂片
實驗步驟
1. 取小白鼠一只,每日腹腔注射6%淀粉肉湯1ml,連續注射三天。
2. 在第三天注射后3~4h,再向腹腔注射生理鹽水1ml,過3min后在原注射部位抽取腹腔液0.1~0.2ml。請注意!注射和抽液的進針部位和深度要保持一致。否則可能抽不出腹腔液。
3. 將腹腔液滴在預冷的載玻片上,每片1~2滴,涂片,將玻片垂直插入玻片架,迅速放到冰箱內(4℃),讓細胞自行鋪展。
4. 30min后,將玻片轉入10%中性福爾馬林,冰箱內4℃固定30min。
5. 自來水漂洗5min,把水甩干。
6. 轉入酸性磷酸酶作用液中,37℃處理30min。
7. 自來水漂洗片刻。
8. 1%硫化胺處理3~5min。
9. 自來水沖洗,甩干。
10. 用1∶30的姬姆薩染液染色15min。
11. 自來水沖去染液,用磷酸鹽緩沖液臨時封片,鏡檢。
12. 對照實驗:
將第3步的腹腔液涂片置50℃溫箱中處理30min,使酶失活,再進行6~11步的同樣實驗。