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  • 發布時間:2019-04-19 07:04 原文鏈接: 酸性磷酸酶的顯示方法

    實驗概要

    酸性磷酸酶能分解磷酸脂而釋放出磷酸基。在pH5.0的環境中,磷酸基能與鉛鹽反應形成磷酸鉛。但因其是無色的,所以再經過與硫化銨作用,形成棕黑色的硫化鉛沉淀,由此就能顯示酸性磷酸酶在細胞內的存在與分布。

    主要試劑

    10%中性福爾馬林(pH6.8~7.1)

    酸性磷酸酶作用液

    2%β—甘油磷酸鈉 4ml

    1%硫化胺溶液

    姬姆薩染液(1:30)

    6%淀粉肉湯

    實驗材料

    小鼠腹腔液涂片

    實驗步驟

    1. 取小白鼠一只,每日腹腔注射6%淀粉肉湯1ml,連續注射三天。

    2. 在第三天注射后3~4h,再向腹腔注射生理鹽水1ml,過3min后在原注射部位抽取腹腔液0.1~0.2ml。請注意!注射和抽液的進針部位和深度要保持一致。否則可能抽不出腹腔液。

    3. 將腹腔液滴在預冷的載玻片上,每片1~2滴,涂片,將玻片垂直插入玻片架,迅速放到冰箱內(4℃),讓細胞自行鋪展。

    4. 30min后,將玻片轉入10%中性福爾馬林,冰箱內4℃固定30min。

    5. 自來水漂洗5min,把水甩干。

    6. 轉入酸性磷酸酶作用液中,37℃處理30min。

    7. 自來水漂洗片刻。

    8. 1%硫化胺處理3~5min。

    9. 自來水沖洗,甩干。

    10. 用1∶30的姬姆薩染液染色15min。

    11. 自來水沖去染液,用磷酸鹽緩沖液臨時封片,鏡檢。

    12. 對照實驗:
    將第3步的腹腔液涂片置50℃溫箱中處理30min,使酶失活,再進行6~11步的同樣實驗。


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