• <noscript id="yywya"><kbd id="yywya"></kbd></noscript>

  • 因此,在電泳時應盡量避免使用具有高電滲作用的支持物。

    醋酸纖維薄膜電泳是用醋酸纖維薄膜作為支持物的電泳方法。

    醋酸纖維薄膜由二乙酸纖維素制成,它具有均一的泡沫樣的結構,厚度僅120微米,有強滲透性,對分子移動無阻力,作為區帶電泳的支持物進行蛋白電泳有簡便、快速、樣品用量少、應用范圍廣、分離清晰、沒有吸附現象等優點。目前已廣泛用于血清蛋白、脂蛋白、血紅蛋白和同功酶的分離及用在免疫電泳中。

    三、器材及試劑:

    1.器材

    ①醋酸纖維薄膜(2×8cm)

    ②常壓電泳儀

    ③點樣器(蓋玻片)
    ④培養皿(染色及漂洗用)

    ⑤粗濾紙

    ⑥玻璃板

    ⑦竹鑷

    ⑧白磁反應板

    ⑨人血清或雞血清

    2.試劑:

    ①巴比妥緩沖液(PH8.6,離子強度0.07):巴比妥2.76克,巴比妥納15.45克,加水至1000毫升。

    ②染色液:含氨基黑10B0.25克,甲醇50毫升,冰醋酸10毫升,水40毫升(可重復使用)。

    ③漂洗液:含甲醇或乙醇45毫升,冰醋酸5毫升,水50毫升。

    ④透明液:含無水乙醇7份,冰醋酸3份。

    四、操作步驟:

    1.浸泡:用鑷子取醋酸纖維薄膜1張(識別出光澤面與無光澤面,并在角上用鉛筆做上記號)放在緩沖液中浸泡20分鐘。

    2.點樣:把膜條從緩沖液中取出,夾在兩層粗濾紙內吸干多余的液體,然后平鋪在玻璃板上(無光澤面朝上),將點樣器先在白磁板上的血清中沾一下,再在膜條一端2—3厘米處輕輕地水平落下并隨即提起,這樣即在膜條上點上了細條狀的血清樣品。

    3.電泳:在電泳槽內加入緩沖液,使兩個電極槽內的液面等高,將膜條平懸于電泳槽支架的濾紙橋上。(先剪裁尺寸合適的濾紙條,取雙層濾紙條附著在電泳槽的支架上,使它的一端與支架的前沿對齊,而另一端浸入電極槽的緩沖液內。用緩沖液將濾紙全部潤濕并驅除氣泡,使濾紙緊貼在支架上,即為濾紙橋。它是聯系醋酸纖維薄膜和兩極緩沖液之間的“橋梁”。)膜條上點樣的一端靠近負極。蓋嚴電泳室。通電。調節電壓至160V,電流強度0.4—0.7毫安/厘米膜寬,電泳時間約為60分鐘。

    4.染色:電泳完畢后將膜條取下并放在染色液中浸泡10分鐘。

    5.漂洗:將膜條從染色液中取出,置漂洗液中漂洗數次至無蛋白區底色脫凈為止,可得色帶清晰的電泳圖譜。

    6.定量:有兩種方法

    (1)將上述漂凈的薄膜用濾紙吸干,剪下各種蛋白質色帶,分別浸于4.0ml0.4mol·l-1NaOH溶液中(37℃)5—10分鐘,色澤浸出后,比色(590nm)。設各部分的光密度分別為:

    (2)把薄膜放在濾紙上用電吹風吹干,待薄膜完全干燥后,浸入透明液中約5—10分鐘,取出,平貼于干凈玻璃片上,自然干燥或用電吹風冷風吹干,即得背景透明的電泳圖譜,可用刀片刮開并從玻板上取下圖譜。能用光密度計測定各蛋白斑點。此圖譜可長期保存。

    用本法測得血清蛋白各組分的正常值為:

    白蛋白=67.24%(61.2—74.5%)

    α1球蛋白 α2球蛋白 β球蛋白=16.92%(11.2—22%)

    γ球蛋白=15.84%(10.4—20.6%)


  • <noscript id="yywya"><kbd id="yywya"></kbd></noscript>
  • 东京热 下载