重組的果蠅NAP－1的表達和純化實驗2

見基本方案

見基本方案咪唑的 Superflow 層析緩沖液

見基本方案NTA Superflow 樹脂（Qiagen）FPLC 柱

1. 實驗前準備

主要材料見基本方案

附加材料

含有 20 mmol/L 和 500 mool/L 咪唑的 Superflow 層析緩沖液

NTA Superflow 樹脂（Qiagen）

C-10/10 或 C-10/20 FPLC 柱（Amersham Pharmacia Biotech）

2. 使用FPLC，按每 500 ml 原細胞培養體積：1 ml NTA Superflow 樹脂的比例，在 20% 乙醇中裝好 NTA Superflow 柱。將柱裝入 FPLC 裝置中。

3. 用 5 倍柱體積的含有 20 mmol/L 咪唑的 Superflow 層析緩沖液平衡柱。將基本方案步驟 3 得到的上清上樣到柱上。

4. 用 5 倍柱體積的含有 20 mmol/L 咪唑的 Superflow 層析緩沖液平衡柱。用 10 倍柱體積的含有 20 mmol/L 到 500 mmol/L 咪唑梯度的 Superflow 層析緩沖液洗脫蛋白質。

5. 每個組分各取 5 ul 進行 15% SDS-PAGE 凝膠電泳，合并蛋白峰。繼續基本方案的步驟 6。