實驗方法原理 MT是一種低分子量的蛋白質,含有大量的半胱氨酸,并對金屬有較高的親和性。
實驗材料 牛血紅蛋白
試劑、試劑盒 氯化鎘Tris-HCl蔗糖
儀器、耗材 分光光度計離心機
實驗步驟
一、實驗步驟
1. 組織按1:4(w/v)加入0.25 mol/l 蔗糖溶液,制備勻漿,18 000 g離心20 min(4℃)。
2. 取上清液0.5 ml,加入1.9 ml 0.03 mol/l Tris-HCl緩沖液(pH8.0)。
3. 再加入1 ml CdCl2(10ppm)混勻,室溫孵育5 min。
4. 加入2%牛血紅蛋白0.2 ml,沸水浴1 min,室溫離心1 000 g,5 min。
5. 反復加入牛血紅蛋白,加熱、離心3次。
6. 在原子吸收分光光度計,用石墨法測定上清液Cd含量。
7. 組織MT含量按6 g原子Cd結合可分子MT計算。
8. 按Bradford 法測定上清液中的蛋白質含量。