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  • 發布時間:2020-08-11 12:50 原文鏈接: 金屬硫蛋白的測定實驗

    實驗方法原理 MT是一種低分子量的蛋白質,含有大量的半胱氨酸,并對金屬有較高的親和性。

    實驗材料 牛血紅蛋白

    試劑、試劑盒 氯化鎘Tris-HCl蔗糖

    儀器、耗材 分光光度計離心機

    實驗步驟

    一、實驗步驟


    1.  組織按1:4(w/v)加入0.25 mol/l 蔗糖溶液,制備勻漿,18 000 g離心20 min(4℃)。


    2.  取上清液0.5 ml,加入1.9 ml 0.03 mol/l Tris-HCl緩沖液(pH8.0)。


    3.  再加入1 ml CdCl2(10ppm)混勻,室溫孵育5 min。


    4.  加入2%牛血紅蛋白0.2 ml,沸水浴1 min,室溫離心1 000 g,5 min。


    5.  反復加入牛血紅蛋白,加熱、離心3次。


    6.  在原子吸收分光光度計,用石墨法測定上清液Cd含量。


    7.  組織MT含量按6 g原子Cd結合可分子MT計算。


    8.  按Bradford 法測定上清液中的蛋白質含量。

     


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