1.增菌：取 1:10 稀釋的樣品 10mL 接種到 90mL SCDLP 液體培養基中，置 36℃±1℃培養箱，培養 24h±2h。
注：如無此培養基也可用 7.5%氯化鈉肉湯。
2.分離：自上述增菌培養液中，取 1—2 接種環，劃線接種在 Baird Parker 平板培養基，如無此培養基也可劃線接種到血瓊脂平板，置 36℃±1℃培養 48h。在血瓊脂平板上菌落呈金黃色，圓形，不透明，表面光滑，周圍有溶血圈。在 Baird Parker 平板培養基上為圓形，光滑，凸起，濕潤，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明帶。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的軟度。偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落，但無 混濁帶及透明帶。挑取單個菌落分純在血瓊脂平板上，置 36℃±1℃培養 24h±2h。
3.染色鏡檢：挑取分純菌落，涂片，進行革蘭氏染色，鏡檢。金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性菌，排列成葡萄狀，無芽胞，無莢膜，致病性葡萄球菌，菌體較小，直徑約為 0.5μm—1μm。
4.甘露醇發酵試驗：取上述分純菌落接種到甘露醇發酵培養基中，在培養基液面上加入高度為 2mm—3mm 的滅菌液體石蠟，置 36℃±1℃培養 24h±2h，金黃色葡萄球菌應能發酵甘露醇產酸。
5.血漿凝固酶試驗：吸取1:4新鮮血漿0.5mL，置于滅菌小試管中，加入待檢菌24h±2h肉湯培養物0.5mL。混勻，置36℃±1℃恒溫箱或恒溫水浴中，每半小時觀察一次，6h之內如呈現凝塊即為陽性。同時以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉湯培養物及肉湯培養基各0.5mL，分別加入無菌1:4血漿0.5mL，混勻，作為對照。