免疫熒光標記是微生物學、免疫學、病理學及免疫組織化學中常用的一種免疫學實驗方法，在臨床上得到了廣泛的應用。
| 實驗方法原理 | 免疫熒光標記技術（immunofluorescence technique）是將已知的抗體或抗原分子標記上熒光素，當與其相對應的抗原或抗體起反應時，在形成的復合物上就帶有一定量的熒光素，在熒光顯微鏡下就可以看見發出熒光的抗原抗體結合部位，檢測出抗原或抗體。
此實驗方案介紹了一種經三步反應的技術，它通過使用鏈親和素-第二抗體結合物，然后再與生物素-熒光染料結合物反應，提高了免疫組化反應的敏感度。 |
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| 實驗材料 | 組織樣品 |
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| 試劑、試劑盒 | 生物素熒光染料鏈親和素 |
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| 儀器、耗材 | 離心機搖床 |
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| 實驗步驟 | 1. 將濕紙巾鋪于載玻片盒底部做成加濕盒，由冰凍切片儀中取出載有切片的載玻片，放入玻片盒中（每邊放6片），或故濕盒中（載玻片勿相互接觸）。 2. 待載玻片達室濕且未干時，鋪加PBS于切片上（勿溢出玻片）。 3. 稀釋的第一杭體于4℃用微量離心機以13 500 g 離心2 min（每一載玻片上加40~50 ul 抗體，應能蓋住切片）。 4. 用與泵相連的巴斯德吸管，在切片的一端吸去玻片上的PBS，并從另一端加上抗體，蓋上加濕盒，室溫溫育1 h。
5. 以PBS冼玻片3次（5 min/次），從切片一端加入新的PBS緩沖液，由另一端吸去舊的緩沖液。
6. 稀釋的生物素酰化第二抗體于4℃用微量離心機以13 500 g 離心2 min（每一載玻片用40~50 ul抗體）。
7. 加第二抗體于切片上，置加濕盒中，室溫溫育1 h。 8. 以PBS洗玻片3次（毎次洗15 min）加熒光染料-鏈親和素于切片上（每一載玻片用40~50 ul 抗體）。置加濕盒中、室溫溫育1 h，以PBS洗玻片3次。
9. 將蓋玻片放于紙巾上，滴加1滴Gelvatol 于蓋玻片中央。翻過載玻片放于蓋玻片上（勿施壓），將玻片置工作臺上，用鋁箔覆蓋避光放置30 min，使Gelvatol 凝結。 10. 顯微鏡下觀察結果，或置玻片盒中貯于4℃。 展開 |
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| 注意事項 | 1、熒光染色后一般在1h內完成觀察，或于4℃保存4h，時間過長，可能會使熒光提前衰退。
2、每次試驗均需設置以下三種對照：
(1) 陽性對照：陽性血清+熒光標記物;
(2) 陰性對照：陰性血清+熒光標記物;
(3) 熒光標記物對照：PBS+熒光標記物。 展開 |
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