各位先生，各位女士，各位來賓，各位領導，各位海外僑胞，港澳同胞，
歡迎參加兩位新人的結婚晚會
哦 啊 拿錯了， 這是我明天參加婚禮的發言
這個才是
各位戰友 我們來聊聊PCR ：）
PCR可以說是目前分子生物學實驗中應用最為廣泛的一種技術。從最初的在幾個水浴鍋里把試管放來放去，到現在各種先進的PCR儀， 到REAL TIME PCR。 設備是越來越先進，方法是越來越多，但基本的原理還是那套。然而實際操作中，仍然有很多的問題讓人頭疼。正好看到有人建議來個PCR討論區，就信手來了這么一篇，希望能拋磚引玉 順手牽羊 大海撈針 針鋒相對 對對對 對不上來了.
PCR的原理： 別 別 別砸我，只是個標題，在這里寫PCR原理實在是浪費大家時間
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(此處略去1000字)
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增加PCR的特異性：
1. primers design
這是最重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些條件
a. 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的引物同樣會降低特異性,并且降低產量
b. GC% 40%~~~~60%
c. 5'端和中間序列要多GC,以增加穩定性
d. 避免3'端GC rich, 最后3個BASE不要有GC,或者最后5個有3個不要是GC
e. 避免3'端的互補, 否則容易造成DIMER
f. 避免3'端的錯配
g. 避免內部形成二級結構
h. 附加序列(RT site, Promoter sequence)加到5'端, 在算Tm值時不需要加上這些序列,但在檢測互補 和二級結構是要加上它們
i. 需要使用兼并引物時,