間充質干細胞（MSCs）鑒定

MSCs                                                          

無菌CCM                                                                  PBSA                                                                  0.85%臺盼藍鹽溶液                                                                  胰蛋白酶 EDTA                                                          

聚丙烯離心管                                                                  15 ml或50 ml                                                                  塑料組織培養皿                                                                  直徑15 cm                                                                  移液器槍頭                                                                  非滅菌結晶紫溶液                                                                  蒸餾水                                                                  改良的Neubauer血細胞計數器                                                                  移液器                                                          

(a)進行MSCs收集和傳代。對懸液中的剩余細胞重新計數以確保準確性。

(b)用CCM制備濃度為1000個細胞/ml的MSCs懸液。

(d準備3個15 cm培養皿，每個加人25 ml預熱的新鮮CCM。

(d)向每個培養皿中加人100μL懸液（100個細胞），晃動培養皿使細胞分布均勻，在37℃，5% CO₂環境下孵育3周。

(e)3周后，從CFU培養物中吸出培養基，用PBSA潤洗培養皿3次。

(f)每個培養皿中加人10 ml結晶紫溶液，室溫孵育5?10 min。

(g)吸出染液，用蒸餾水潤洗，直到背景被清除。

(h)計數每個培養皿中的集落數，取其平均值，計算貼壁率或“CFU潛能”（形成的CFU相對于接種個數的百分比）。培養良好的MSCs—般CFU潛能大于40%。