1、細胞準備與固定
（1）單層生長細胞：取對數生長細胞，用0.25％胰蛋白酶消化，制成單細胞懸液。將細胞接種到預先放置幾張6×22mm蓋玻片的培養瓶或培養皿中，置二氧化碳培養箱培養1-3天，待細胞接近長成單層，取出蓋玻片，進入PBS（0.01 mol/L,pH7.4）洗2次，然后根據實驗目的，選擇適當固定劑固定細胞。常用固定劑有：95％乙醇（固定時間10-30min），丙酮（5－10min）等。
（2) 懸浮生長細胞：取對數生長細胞，用PBS離心洗滌（1000rpm，5min）2次，或用細胞離心甩片機制備細胞片或直接制備細胞涂片，把細胞片浸入95％乙醇或丙酮中固定。
2、將已經固定的細胞玻片放入蓋片染色缸，用PBS振洗5min，取出吹干。
3、滴加適當稀釋的特異性抗體，置于濕盒內，37度保溫30－60min或度冰箱過夜。
4、PBS振洗3次，每次5min，吹干。
5、滴加適當稀釋的熒光素標記抗體，置于濕盒內，37度保溫30－60min。
6、PBS振洗2次，每次5min，然后用蒸餾水振洗1次。
7、50％緩沖甘油封片。