（1） 滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標本片上，10min后棄去，使標本保持一定濕度。
（2） 滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液，使其完全覆蓋標本，置于有蓋搪瓷盒內，保溫一定時間(參考：30min)。
（3） 取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不時振蕩。
（4）取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
（5）立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度，一般可用“+”表示：
(-)無熒光；(±)極弱的可疑熒光；(+)熒光較弱，但清楚可見；(++)熒光明亮；(+++ --++++)熒光閃亮。待檢標本特異性熒光染色強度達“++”以上，而各種對照顯示為(±)或(-)，即可判定為陽性。